最新应用：螺旋藻中多环芳烃的检测

　　前言

　　螺旋藻又名蓝藻，因其富含优质蛋白质、多种维生素及生物活性物质，正日益受到人们的广泛重视。但是近年来我国出口到欧盟的螺旋藻及其相关产品由于多环芳烃超标问题遭遇多次通报，而目前国家还没有制定关于螺旋藻中多环芳烃检测的标准方法，因此，建立测定螺旋藻中多环芳烃的方法具有重要的意义。本文参考海洋生物体中多环芳烃的提取方法，建立了由高效溶剂萃取、凝胶净化和气质联用检测的整体螺旋藻多环芳烃的提取检测方法。实 验结果显示，对于客户要求的䓛(CHR)、苯并(a)蒽(BaA)和苯并(b)荧蒽(BbF)这三种多环芳烃 的加标回收率在 84.4~117.3%之间。

　　1.试剂和设备

　　1.1 试剂 色谱纯溶剂：正己烷，二氯甲烷，环己烷 ，乙酸乙酯

　　​硅藻土，200 目，AR：使用前在 300℃下烘烤 2h

　　弗罗里硅土，200 目，AR：使用前在 300℃下烘烤 2h

　　多环芳烃混合标样，10ppm

　　1.2 设备

　　 HPSE 高效溶剂萃取仪，莱伯泰科北京公司；

　　 GStation-G 全自动凝胶净化系统，莱伯泰科美国公司；

　　 M8 平行浓缩仪，莱伯泰科北京公司；

　　 GC/MS 气相色谱质谱联用仪

　　2. 实验过程

　　2.1 样品萃取

　　​ 分别称取 2g 螺旋藻粉末，3g 硅藻土和 5g 弗洛里硅土。把 2g 螺旋藻粉末和 3g 硅藻土 混合并且充分混匀。准备好 2 个 22mL 萃取罐，萃取罐底部依次装入滤膜、筛板，最后用底 座螺母固定好。

　　​ 样品装填：将萃取罐放于支架上，入口端放置好专用漏斗，首先将 5g 弗罗里硅土倒入 罐体中，并用夯实杆夯实。然后再将混合好的螺旋藻/硅藻土粉末倒入到罐体中，并用夯实 杆夯实。将装填好的罐体放入 HPSE 高效溶剂萃取仪中，调用相应的方法（见图 1），进行 萃取，最后将萃取液收集到 60mL 的圆底试管中，并在 35℃下氮吹至近干，加入 5mL 乙酸 乙酯/环己烷（v/v 1:1）混合溶剂。

　　 加标样品：在 2g 螺旋藻粉末中加入 5μL 的 10ppm 多环芳烃标样，混匀，加标浓度相 当于 25ug/kg。其余步骤同上。

　　实验中，HPSE 高效溶剂萃取仪同时可以做 2 个样品，1 个是未加标样品，1 个是加标 样品。

图 1 样品的高效溶剂萃取方法

　　2.2 GPC 净化

　　​GPC 净化条件：

　　​柱子：Bio-beads S-X3，20*300mm；

　　流动相：乙酸乙酯和环己烷混合液（1:1，v/v）；

　　流速：5mL/min；

　　进样量：5mL；

　　检测器波长：254nm；

　　 收集时间：14~33min；

　　收集液用 MultiVap-8 在 35℃下氮吹至 0.5mL。然后用乙酸乙酯定容至 1mL 作为最后分 析的样液。

　　2.3 GC-MS 测试分析

　　 GC 条件：

　　 色谱柱：HP-5MS 30m*0.25mm*0.25μm

　　 进样口温度：300℃

　　​载气：氦气，流速：1mL/min

　　不分流进样，1min 后分流 60mL/min

　　进样量：1μL

　　柱箱：50℃，保持 3min，以 10℃/min 升至 280℃，保持 12min

　　质谱条件：

　　 溶剂延迟：8min

　　离子源温度：150℃

　　四极杆温度：230℃

　　传输线温度：290℃

　　扫描方式：SIM

　　在上述的气质条件下，对样液进行气质分析。

　　3. 实验结果

　　3.1 GPC 分析结果

　　​3.2 标样 GC/MS 分析

　　 图 4 为浓度 50ppb 混标的 SIM 扫描色谱图，其中苯并(a)蒽、䓛和苯并(b)荧蒽的出峰时 间为 25.271min、25.362min 和 28.004min。

　　3.3 样品分析

　　 3.2.2 样品空白

　　​图 5 为样品经过萃取、净化后的 GC-MS 色谱图，从整体基线来看，净化效果良好，基 本不影响目标峰的定性定量，详见图 6。图 6 可看出样品中含有一定量的苯并(a)蒽、䓛和苯 并(b)荧蒽。

　　​3.2.3 样品加标回收率

　　​上述分析可知样品中含有一定量的目标物，所以样品加标回收率实验中以样品作为空白， 计算加标回收率。

　　图 7 为样品加标后经萃取、净化后的 SIM 扫描色谱图。将该图得到的三个目标物峰面 积扣去样品空白中三个目标物的峰面积后和加入的标样（50ppb）对比，得出加标回收率如 下表 1 所示。

　　参考文献： [1] 方捷，海洋生物体内有机氯农药、多氯联苯和多环芳烃的 GPC 净化条件，海洋环境监 测站

　　撰写人：苏丽评 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 应用工程师