1. 包被抗体:用0.05 mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液将已知抗体作适当稀释,在每个聚苯乙烯酶标板的反应孔中加0.1 ml,于4 ℃过夜(18~24 h)。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3 min(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加入待检样品(未知抗原)或作适当稀释的标准参考品于反应孔中,同时作空白孔、阴性和阳性孔对照。37 ℃孵育1 h,洗涤。 3. 加B-Ab:已作适当稀释的生物素化抗体(B-Ab),每孔加0.1 ml,37 ℃孵育30~60 min。洗涤。 4. 加A-HRP:已作适当稀释的辣根过氧化物酶标记的亲和素(A-HRP),每孔加0.1 ml,37℃孵育30~45 min。洗涤4次。 5. 底物显色:于上述各反应孔中加入临时配制的TMB(或 OPD)底物应用液0.1 ml,于37 ℃孵育10~30 min。再加2 mol/L H2SO4 0.05 ml以终止反应。 6. 结果判定:目测或在ELISA比色仪上测 OD 值(见ELISA部分)。
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