核酶切割RNA专一位点

合成的核酶分子 切割底物RNA

Tris-HCl MgCl2

一、材料与设备

1)500 mmol/LTris-HCl(pH7.4)

2)100 mmol/LMgCl₂

3) 合成的核酶分子

4) 切割底物 RNA


二、操作方法

1) 制备切割混合构：不超过 l0 pmol 底物 RNA，l pmol 合成的核酶分子，加水至 8ul, 加 l ul 500 mmol/L Tris-HCl(PH7.4)，混匀。

2) 于 75℃ 加热 1 min, 然后置于冰上。

3) 加 1ul 100 mmol/L,MgCl₂ 于 42℃ 孵育 lh。

4) 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，回收。

1) 切割底物 RNA 和核酶可以通过体外转录的方式获得。

2) 切割底物 RNA 要与核酶匹配，若底物与核酶具较长的碱基配对则可以提髙酶切的特异性，但会降低切割转换数，因此一般选择 5-7 个核苷酸作为互补匹配区。

3) 为获得最佳的切割效果，底物 RNA、核酶的用量，镁离子的浓度、反应温度和反应时间均应通过试验确定。