核酸纯度、浓度与分子量测定实验

实验方法原理 溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm，在此波长下，吸光度1 A相当于一定浓度的核酸，可以通过A260/A280 的比值，来测定所得核酸的纯度。

实验材料 DNA

试剂、试剂盒 琼脂糖TBE电泳缓冲液TE buffer溴化乙锭（EB）载样缓冲液

仪器、耗材 电泳仪电泳槽电子天平移液器枪头点样板微波炉紫外分光光度仪凝胶图象分析仪

实验步骤

1.  将分光光度计打开，预热10分钟。

2.  将核酸溶液中取2 µl，加（或纯水）使体积成为100 µl。

3.  将稀释溶液加入石英管，以TE buffer（或纯水）为标准倒入另一管。

4.  在波长260、280 nm 处测定吸光值。

5.  比较在260 nm 及280 nm 之读值。

注意事项

1.  A260/A280>1.8表示DNA/RNA的纯度高。若数值<<1.8，表示纯度低，这时由OD260测得的DNA含量较不可信，核酸溶液中含有较多蛋白质，因此最好将前述所得核酸再重新抽取。

2.  测定260 nm吸光值，OD=1.0代表值如下：

（1）ds DNA （double stranded DNA） = 50 mg/ml

（2）ss DNA （single stranded DNA or simgle-stranded RNA） = 40 mg/ml
 
（3）oligonucleotide = 33 mg/ml
 
3.  EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。