梅毒螺旋体诱导巨噬细胞分泌的外泌体特征

　　为了探讨梅毒螺旋体（Tp）体外诱导巨噬细胞分泌的外泌体特征及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖水平的影响，中国医学科学院 许卜方、王千秋等人自雄兔睾丸分离Tp。将人单核巨噬细胞（THP-1）诱导为巨噬细胞后，分为实验组（Tp刺激）和对照组（不用Tp刺激），12 h后继续培养48 h，收集巨噬细胞外泌体悬液，利用差速离心法和膜亲和试剂盒提取外泌体，运用透射电镜、Western印迹鉴定外泌体，Nanoparticle tracking analysis（NTA）粒径分析仪定量分析外泌体。将HUVEC分为实验组、对照组和外泌体洗脱液组，分别用外泌体悬液（4.5 × 108颗粒，实验组和对照组）、外泌体洗脱液刺激培养一定时间后，激光共聚焦扫描显微镜观察HUVEC对外泌体的吞噬，CCK8法检测HUVEC增殖活性。

　　结果发现：透射电镜下的外泌体呈杯托样，为直径30 ~ 100 nm的微小囊泡。Western印迹显示，外泌体丰富表达膜蛋白CD63、CD9和CD81。相同实验条件下，NTA测定显示，实验组与对照组外泌体粒径（u = 1.90，P > 0.05）、浓度（z = -1.604，P = 0.109）差异均无统计学意义。两组外泌体分别与HUVEC共培养5 h后，激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的绿色荧光外泌体。实验组、对照组外泌体分别作用于HUVEC 12 h后细胞增殖水平均高于外泌体洗脱液组，差异均有统计学意义（P < 0.05）；在24 h和48 h时对照组细胞增殖水平仍高于外泌体洗脱液组，在48 h达到峰值（P < 0.05），实验组细胞增殖水平趋于正常；在72 h时实验组、对照组细胞增殖水平与外泌体洗脱液组差异无统计学意义（P > 0.05）。

　　THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体在48 h内能显着提高HUVEC细胞增殖水平，在48 h达到峰值。在Tp刺激下，THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体在形态、大小、浓度上与无Tp刺激巨噬细胞分泌的外泌体相似，但仅在短时间（12 h）内提高HUVEC增殖水平。