检测DNMT3A基因突变的引物、试剂盒和方法与流程

急性髓系白血病(aml)是造血系统常见的恶性肿瘤之一，以髓系原始细胞在骨髓中增殖失控、分化阻滞和凋亡受抑制为主要的生物学特点。

dnmt3a主要编码甲基转移酶，催化甲基至cpg岛的胞嘧啶残基，引起下游基因的表达减少。dnmt3a的突变会导致dna的异常甲基化，而dna异常的甲基化将通过影响染色体结构稳定性和dna复制、重组与修复，从而促发肿瘤恶性克隆的发生与快速扩增。有研究表明，在成人aml患者中，存在大约11-35％的dnmt3a基因突变，是急性髓系白血病中突变最频繁的前三个基因之一，且大部分突变是位于r882，也就是c.2645位点的错义突变。dnmt3a的这一突变会导致正常细胞接收了错误的遗传指令而形成可以后期转变为aml细胞的不成熟的的前体细胞。lu等研究发现dnmt3a突变是急性白血病形成的必要条件，虽然这一突变自身不足以引起癌症，但是它可以与ras基因缺陷共同作用驱动癌症。

目前对于具有dnmt3a突变表达的aml患者的治疗主要在于化疗，但近年来有报告称具有dnmt3a突变的aml细胞对特异的dot1l药物抑制剂敏感。dot1l是一种细胞酶，参与调节基因的表达活性，目前有一些dot1l抑制剂正在接受临床评估。这一研究表明了对于携带dnmt3a突变的aml患者可能有潜在的个体化诊疗策略。

另外，ley等研究发现dnmt3a突变主要发生在aml的m4和m5两种亚型中。在正常核型的aml患者中dnmt3a基因突变率在19.2％-75％，异常核型的患者突变率低或无突变，这表明在正常核型的aml患者中dnmt3a基因更易发生突变，并且可能与预后密切相关。

综上，研究dnmt3a基因的突变情况，可以有效的对aml患者的预后进行判断，为后期治疗提供有效的建议。本发明所述的方法可以及早检测是待检样本中是否存在dnmt3a最主要的突变位点c.2645位点的突变情况，从而帮助医生判读患者属于aml的哪种分型，更精准得判断患者的预后，给与患者合理的治疗建议，甚至可以给出个体化的治疗策略，延长患者生命周期。