植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析

一、目的
 掌握植物基因组DNA提取的一般方法及注意事项。大分子量DNA分子的酶切分析。

 二、原理
 十六烷基三乙基溴化胺是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3
 mol/L
 NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。

 三、试剂与器材
 （一）、试剂
 1 、DNA extraction ：500ml
   31.885g  sorbitol (山梨醇)
   6.05g    tris   PH8.2  (一般不调)
 2、Nuclei lysis buffer: 500ml
   100ml       1M  Tris PH7.5
   100ml       0.25M  EDTA
   200ml       5M    NaCl
   10g         CTAB
   100ml       ddH2O
 3、5% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基钠盐)  500ml
    用时，将上述三种溶液按1：1：0.4 比例混匀，加入亚硫酸氢钠（3.8g/l），65℃预热，既为抽提液。
 （二）器材
     恒温水浴、研钵、电泳设备

 四、操作步骤
 （一）、基因组DNA提取
 1
 取0.15g左右小麦叶片，在液氮中研磨后放入1.5ml离心管中，加入700ml抽体液（65℃预热）混匀，放入65℃水浴中，裂解40-60分钟，期间温和混匀几次。
 2 取出裂解好的DNA ，加入700ml氯仿：异戊醇（24：1），猛烈混匀，离心（1000rpm，10分钟）。
 3 取上清于新管中，（不要混入氯仿），加入0.8-1倍预冷异丙醇，缓慢混匀后，再猛烈混匀，使DNA成团，-20℃放半小时以上。
 4 将析出的DNA 离心，14000rpm，10分钟。
 5 去掉上清，将沉淀用1ml 70% 乙醇清洗一次，离心 干燥，溶于50ml ddH2O。

 （二）、酶切及电泳分析
   取四支1.5ml离心管，分别写上标记：g/EcoRⅠ（学号）、g/HindⅢ（学号）、λ/EcoRⅠ（学号）和λ/ Hind Ⅲ（学号）。
   前两支试管加入30 ml基因组DNA。后两支试管加入3mlλ基因组DNA。
   前两支加入5 ml 10×buffer。后两支加入2ml 10×buffer。
   前两支分别加入ddH2O 12.5ml，后两支分别加入ddH2O 13ml
   分别加入RNase 1 ml。
   前两支试管分别加入1.5 ml  EcoRⅠ和Hind Ⅲ，10000rpm离心20 S混匀。前两支试管分别加入1 ml EcoRⅠ和Hind
   Ⅲ，10000rpm离心20 S混匀。
   37℃反应4h
   0.8%琼脂糖凝胶电泳（样品全部点样）。
   观察记录并分析实验结果