植物徒手切片与植物细胞结构观察

[目的要求]

1.掌握植物  徒手切片技术。

2.观察认识植物细胞的基本结构，质体的形态。

3.认识和鉴定植物细胞内常见的后含物。

[材料用品]

材料：洋葱鳞茎或番茄果实、葫芦藓叶、红辣椒、鸭跖草叶片、马铃薯块茎、蓖麻种子、花生种子。

用品：I-KI溶液、苏丹溶液、显微镜、解剖针、镊子、双面刀片、载玻片、吸管、蒸馏水等。

[方法与步骤]

一、植物徒手切片

(一)选材

一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料，所取的新鲜材料应及时放入水中，以免徒手切片时萎蔫。材料太硬时，可用1.5%的氢氟酸或用甘油和70%酒精的等量混合液进行软化处理;材料太软时，可用马铃薯块茎、胡萝卜肉根等作支持物，把材料夹在其中进行切片。对有些植物的叶片可卷成筒状进行切片或用三片双面刀片制成简易的“切刀”进行切片。取材的大小，一般直径不超过5mm，长度以15-25mm为宜。

(二)切片

1.把欲切的材料用刀削成大小适宜的段块，并将切面削平，然后将材料和刀片蘸水湿润(以后每切一片都要用水湿润)。

2.用左手的拇指、食指和中指夹住材料。为防止切片时割伤手指，应使材料上端(切面)略高与食指，拇指略低于食指。用右手的拇指和食指捏住刀片一端，置于右手食指之上，刀片和材料切面平行，刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置。

3.以均匀的力量和平稳的动作使刀刃自左前方向右后方斜滑拉切，注意不要直切，中途不停顿，拉切速度要快，不要推前拖后(拉锯式)切割，左手食指向下稍微移动，使材料略有上升，从而调动每张切片的厚度。切片过程中右手不动，只是右臂移动，动作用臂力而不用腕力。

4.切片要薄、平而完整，将切下的切片用毛笔刷蘸水从刀片上轻轻移入培养皿的清水中或直接将刀片浸没于水中使切片漂洗下来

(三)临时装片制作

同上节课方法。

二、植物细胞的基本结构

(一)制作临时装片

首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻片中央，滴加一、二滴清水，然后撕取洋葱鳞茎肉质鳞片叶上表皮(近轴面)一小块放水滴中，用解剖针展开后，将盖玻片轻轻盖上，盖盖玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下，接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡，影响观察。如仍有气泡，可用镊子加压盖玻片，将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。

(二)观察

临时装片制成后，置显微镜下观察。先在低倍镜下观察细胞的形态结构及排列状态，然后在盖玻片的一边加上一滴I-KI溶液，用滤纸条在另一边吸引溶液，使细胞染色。结果细胞被染成棕黄色，然后转换高倍镜观察。

洋葱表皮细胞排列整齐，呈长方形，每一个细胞周围有明显的界限，这就是细胞壁。细胞壁里面为原生质体，其中有一个染色较深，呈黄色的小圆球体为细胞核  。幼嫩细胞，核居中央，细胞核与细胞壁之间为细胞质，在成熟细胞中。细胞中央形成中央大液泡，染色较浅。细胞质成一薄层紧贴细胞壁，细胞核也由中央移向边位，表皮细胞初看好象是一个平面的，但在高倍镜下，慢慢调节细准焦螺旋，就可看到细胞的上壁或下壁，说明细胞是立体的。

用镊子或者解剖针挑取少许成熟番茄果肉，制成临时装片。置低倍镜下观察，细胞圆球形，呈分散状态，细胞形状和排列与洋葱表皮细胞不同，也可清楚地看到细胞壁、细胞核、细胞质和液泡，其基本结构与洋葱表皮细胞是相同的。

三、质体的观察

1.叶绿体

用镊子摄取新鲜葫芦藓叶片，作临时装片。置显微镜下观察，可见细胞中有很多绿色颗粒，这就是叶绿体。

2.杂色体

从红辣椒果实上切一小薄片，或取一小块辣椒，用刀片刮去果肉。置载玻片下，加一滴清水。盖上盖玻片，在显微镜下观察。细胞中有许多红色小颗粒，这就是杂色体。杂色体分散在细胞质中。

3.白色体

撕取鸭跖草叶表片一小块，做成装片。置显微镜下观察，在细胞核周围可以看到许多透明小粒，即为白色体。

四、植物细胞内的几中后含物

1.淀粉粒：

取马铃薯块茎做徒手切片，置于载玻片上加水两三滴，放在显微镜下观察，细胞内有许多颗粒，注意它们的形状，大小与位置若光线调节得当，可以看到颗粒上具有轮纹。每一个颗粒即一淀粉粒，加一滴稀薄的I-IK溶液，注意淀粉粒被染成什么颜色?

2.贮藏蛋白质：

将蓖麻种子进行徒手切片，选取几片薄的置95%酒精中，以便溶解切片中的脂肪。然后取一片于载玻片中，滴加I-IK，置显微镜下观察。在薄壁细胞中可看到被染成黄色的圆形或椭圆形的糊粉粒。转换高倍镜，观察糊粉中球状体及蛋白质结晶体。

3.脂肪

取花生子叶做徒手切片，置载玻片上，加几滴苏丹Ⅲ溶液。静置十分钟，然后盖上盖玻片，吸去多余的染液，置显微镜下观察，寻找较薄的地方，见细胞内有许多被染成桔红色的小圆球，这便是脂肪球。

五、胞间连丝的观察：

用刀片沿新鲜的红辣椒的果皮表面平行方向，切取一薄片(或把辣椒的果皮面朝上平放桌面上，用快刀刮去肥厚物质，使之很薄)，加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可见其表皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔(纹孔)，孔里有细胞质丝穿过。