植物总DNA的快速少量抽提实验

水稻叶片

液氮 CTAB 氯仿 异戊醇 乙醇 NH4AC EtOH

离心管 离心机

1.  采集适量幼嫩叶片，用液N₂研成粉末，0.4 g装入1.5 ml离心管中（-20 ℃预冷）。

2.  预热1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。

3.  立即置于65 ℃水浴30min，每5分钟，上下颠倒1次。

4.  12000 g离心5分钟。

5.  吸取上清液约600 μl，加入等体积（600 μl）氯仿/异戊醇(24:1)，上下颠倒数次，至下层液相呈深绿色为止。

6.  12000 g离心5分钟。

7.  取450 μl上清于一新1.5 ml离心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH₄AC），混匀，室温放置10min。

8.  12000 g离心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥约30 min。

9.  加入50 μl 1/10 TE或无菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃过夜，待DNA溶解后，检测DNA浓度及质量。

1.  尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质多，必须用10 mM的β-ME处理。

2.  研钵预冻，粉末至加CTAB前不要融化。

3.  24:1的氯仿/异戊醇抽提时动作应轻柔，转移用的枪头最好是剪宽了的。

4.  所用试剂必需灭菌，手套。