植物愈伤组织的培养

愈伤组织是指切取植物体的一部分，置于含有生长素和细胞分裂素的培养液中培养，诱导产生的无定形的组织团块。愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径。

愈伤组织
 

一、无菌播种

(一)实践目的

学习利用植物种子的胚轴进行愈伤组织培养的方法，主要是种子的无菌接种技术。

(二)实践地点和时间

植物组培室

(三)实践用具与材料

超净工作台、手术剪、枪状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、琼脂、蔗糖

(四)实践内容

1、培养基制备

配制MS培养基：用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制，不加植物生长物质。

每升培养基加入30/L蔗糖、8g琼脂，将pH值调节到5.8。

2、高压灭菌

培养基入高压锅1.11-1.12Pa下稳压灭菌23分钟，制备无菌水，同样高压灭菌30分钟，灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。

3、无菌苗的制备

选择健康饱满的种子，流水下清洗干净，置超净工作台上。无菌水冲洗2-3 次后，视材料情况，(较老较硬的种子)可剥离种皮后0.1%升汞灭菌，也可以(较嫩较软的种子)先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。

4、无菌播种

剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后，接种到已制备的MS培养基中，每瓶培养基接种一粒。做好标记，置于培养室光下培养，以后一周随时观察生长状况。

5、清洁整理

清洁整理工作台和组培室，并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。

二、胚轴接种

(一)实践目的

在上次实践基础上进一步学习愈伤组织培养的胚轴切割转接技术，加深对愈伤组织的理解。

(二)实践地点和时间

植物组培室、建议4学时

(三)实践用具与材料

超净工作台、手术剪、枪状镊、解剖刀或刀片、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、记号笔。无菌播种已萌发青豆、无菌播种已萌发豌豆、大量元素、微量元素、维生素、铁盐、BA、2,4—D等母液。

(四)实践步骤

1、制备培养基

为试验观察生长物质对愈伤组织的影响，加深理解，可做对比试验，制备三种培养基

配方1 MS+0.1ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

配方2 MS+0.5ml/LBA+0.1ml/L2.4—D

配方3 MS+0.5ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

2、下胚轴的切割转接

(1)进行超净工作台开启紫外灯、风机，换鞋、穿工作服、清洁双手等常规操作。检查酒精灯、酒精瓶是否该加酒精。

(2)将上周无菌播种成活，已经萌芽的种子放入超净工作台，仔细观察种子，把污染的淘汰掉。

(3)灼烧镊子和解剖刀刀片，冷却，注意不能伤手。

(4)用工具将萌发种子放入培养皿内滤纸上，看清楚的胚轴位置，用镊子和解剖刀刀片等器械除去子叶和胚根，切割胚轴成5mm左右切段。

(5)将切割下来的胚轴移入新培养基内，做好标记，三种配方分别移入标记，放入培养室培养。

3、清洁整理

按常规清洁整理超净工作台和实验室，注意超净工作台不能用酒精擦拭，地面可用洗衣粉拖地，接种室可进行甲醛加高锰酸钾熏蒸，为以后的实验作准备。