植物细胞组织培养

   实验目的

    植物细胞和组织培养的技术性强，要求无菌操作，通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术，加深对无菌操作的了解。

    二．实验原理

    植物的全能性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的全能性。

    植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义，就是指愈伤组织培养。但发展至今，其范围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。

    本实验选择豌豆为材料，豌豆（Pisumsativum）属豆科植物，是粮食、饲料和重要的蔬菜作物，也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体，皆可形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼叶等器官可成功的再生成植株。茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织（生长点）和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。在实践应用上，常采用生长点的培养使患病植物去病毒，以达到挽救优良品种，提高产量和质量之目的。

    三．实验材料

    仪器设备：1．酒精灯、三角烧瓶，培养皿；2．镊子、剪刀、剖针；3．双筒解剖显微镜；4．光照培养箱或温室；

    材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

    试剂

    （1）MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等；

    （2）饱和漂液（次氯酸钠）；

    （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

    （4）无菌水

    四．实验步骤

    豌豆苗的茎尖培养

    ⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株，简取1厘米左右的茎尖，浸入70%的酒精中1分钟，再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟，（此步以后要求无菌）用无菌水中冲洗5次，在灭菌的滤纸上吸干水分，放入灭菌的培养皿中。

    ⑵在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥，用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。

    ⑶将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌呤（6-BA）的培养基上诱导愈伤组织形成，用封口膜将培养皿封好。

    （4）在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，形成愈伤组织，经继代后，可用于生根培养