植物缺水程度的测定实验

实验方法原理 当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

用人造沸石(Permutit)在pH1-7范围内振荡溶液可除去干扰的氨基酸或使其不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯柄氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色的深浅呈正相关，可用分光度计测定。该法有专一性。

仪器、耗材 721分光光度计水浴锅离心机移液管烧杯容量瓶研钵冰醋酸具塞试管脯氨酸80%乙醇茚三酮试剂

实验步骤

二、仪器药品

（1）721分光光度计；（2）水浴锅；（3）离心机；（4）移液管；（5）烧杯；（6）容量瓶；（7）研钵；（8）冰醋酸；（9）具塞试管；（10）脯氨酸；（11）80%乙醇；（12）茚三酮试剂：将2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸中，加热（70℃）溶解，试剂至少在24小时内稳定。

三、实验步骤

1. 绘制标准曲线

取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀释成下列浓度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分别取标准溶液2ml，冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml加入试管中，用橡皮塞塞紧，于沸水浴中加热15分钟。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定，以浓度0为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以光密度为纵坐标作标准曲线。

2. 植株样品液的提取

选取植株功能叶片2g，用3ml 80%乙醇研磨（放少许石英砂），成浆状，用80%乙醇洗研钵，将提取物和洗液置于试管中，80%乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24小时或水浴。

将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣。将提取液置于试管中，加其重1/5的人造沸石强烈振荡5分钟。将上层液在离心机上离心10分钟，取上清液备用。

3. 样品溶液的测定

将离心后所得上清液，取2ml置于试管中，再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热15分钟。用3ml 80%乙醇代替样品液作对照。在分光光度计上用515nm进行比色测定。读出光密度后，从坐标曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。