植物miRNA及piRNA的逆转录

miRNA在植物的发育、抗病、和应激反应中发挥着重要作用。一般认为，这些小的非编码RNA通过靶向mRNA剪切，在后转录水平调节植物的基因表达。这些基因表达中的靶向变化由数百个成熟miRNA的差异表达所调控，每个成熟miRNA结合在靶mRNA的特定序列上。因此，对植物的成熟miRNA调控和表达进行分析，能够为植物的组织发育、干旱保护及疾病防御机理提供宝贵信息。目前基本无法通过qRT-PCR对植物的成熟miRNA进行分析，由于植物miRNA的特性，基于多聚腺苷酸的逆转录反应对其反应效率十分低下。QIAGEN推出了独特的解决方案，能够对植物组织中的成熟miRNA进行通用的逆转录反应。

QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3’端修饰的小RNA的cDNA合成；是针对具有3’端甲基化(2’-O-Me)修饰的小RNA进行无偏差 cDNA合成的通用型试剂盒。本试剂盒专为基于实时定量PCR技术的小RNA表达分析应用设计和优化，能够配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等产品使用。这一类通过功能验证的分析和芯片产品可应用于水稻、玉米、大豆、烟草和其他一些重要农业作物的检测，以及植物学相关的研究。在3’末端碱基具有2’-O-Me甲基化修饰的小RNA（如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA)）中，一般不具有poly A尾结构，因此无法通过多聚腺苷酸依赖的cDNA合成方法有效地反转录。专用的miScript Plant RT Kit通过首先向植物miRNA的3’末端连接一个接头解决了这一难题。不同于多聚腺苷酸化，这一链接反应不会受到植物miRNA 3’末端碱基上存在的2’-O-Me甲基化修饰的负面抑制。接头一旦连接成功，即可实现反转录反应。

性能

miScript Plant RT Kit与miScript Plant qPCR System的联合使用，能够确保针对植物样本实现灵敏和特异性的miRNA检测和定量工作。由于许多miRNA表达丰度很低，因此检测灵敏度对于确保获得可靠数据至关重要。miScript Plant qPCR System能够提供优异的灵敏度，宽广的动态监测范围，以及始终如一的高扩增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能将帮助您于首次尝试时，即在技术重复和生物重复样本之间获得高度可重复的结果。

操作流程

反转录反应可方便地进行。通常在连接反应介导的反转录反应中，一般使用含有3’端2’-O-Me修饰小RNA的总RNA做为起始材料。反转录是一个简单直接的操作步骤，包含了37℃下1小时的温育反应，以及之后在95℃下通过短暂孵育对反应进行失活。

应用

miScript Plant RT Kit通常做为miScript Plant PCR System的一部分，用于进行： 

• 植物成熟miRNA的定量和表达谱分析

• piRNA的定量和表达谱分析