正常人外周血白细胞和红细胞的分离

实验概要

正常人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000～1000:1，两类细胞的沉降速度不同，可进行正常人外周血白细胞分离。利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状，从而加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP)及甲基纤维素等。本实验对正常人外周血白细胞和红细胞进行了分离。

主要试剂

1. 无Ca² 、Mg² Hank’s液。
2. 含10%～20%灭活小牛血清Hank’s液。

3. 3%明胶（粘度为25泊以上)：选取优质明胶，用生理盐水配成3%溶液，置沸水浴加热溶解，分装，高压蒸汽灭菌8磅15～20min。
4. 6%右旋糖酐（分子量200～400KD)：用生理盐水配制。

实验步骤

1. 白细胞分离-自然沉降法

   1) 取静脉血2ml，放入加有抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
   2) 将试管直立静置于室温或37℃温箱中30～60min，待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层（正常人外周血白细胞)。
   3)用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液，移入另一试管中；
   4)加入无Ca² 、Mg² Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次。
   5) 沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×10⁶/min。

2.红细胞分离-加速红细胞沉降法
   1) 取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水或6%右旋糖酐溶液中，混匀。
   2) 将试管直立静置室温或37℃温箱中30～60min，利用明胶与红细胞的粘合作用，促使红细胞快速下沉，而白细胞留在明胶溶液中。
   3) 用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液，移入另一试管中。
   4) 加入无Ca² 、Mg² Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次。
   5) 沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×10⁶/min。