沃特世色谱柱在中药指纹图谱研究中的应用

指纹图谱作为中药复杂样品体系质量控制强有力的技术手段，能够较全面反映中药内在质量，已赢得国际上的广泛认可并得到迅速发展。2010版中国药典收载高效液相色谱特征图谱7项，指纹图谱13项，其中中成药6项，提取物14项，为中药产品质量的控制开辟了新途径，成为我国中药企业的一次重大突破。

1、复方丹参滴丸

【指纹图谱】色谱条件与系统适用性试验
用Waters^® ACQUITY UPLC^® HSS T3（柱长为100mm，内径为2.1mm，1.8μm）色谱柱；以含0.02%磷酸的80%乙腈溶液为流动相A，以0.02%磷酸溶液为流动相B，按中国药典<一部>第907页条件进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温为40℃。理论板数按丹参素峰计算应不低于8000。

2、三七三醇皂苷

【指纹图谱】
按中国药典<一部>第368页条件运行，共有5个色谱峰，其中2号峰为三七皂苷R1，3号峰为人参皂苷Rg1，4号峰为人参皂苷Re，作为参照峰。色谱柱： Waters SymmetryShield™ RP₁₈， 5μm ，250×4.6mm。

3、生脉注射液、参附注射液

【指纹图谱】色谱条件与系统适用性试验
固定相采用Waters SymmetryShield RP₁₈色谱柱（4.6mm×250mm；5.0μm）；柱温30℃，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于1350000。测定法 分别精密吸取参照物溶液和本品各10μl，注入液相色谱仪，测定。在8～95分钟范围内，应呈现十七个与生脉注射液对照指纹图谱相对应的特征峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，以特征峰计算相似度，本品指纹图谱与生脉注射液对照指纹图谱比较，相似度应不得低于0.80。另对供试品色谱图中所有峰面积值高于人参皂苷Rb1峰面积值的百分之五的色谱峰进行积分，非特征峰面积之和不得高于总峰面积的50%。（见国家药典委员会关于生脉注射液、参附注射液质量标准有关内容的公示）

中药指纹图谱研究的特点

适合中药指纹图谱研究的Waters色谱柱推荐

（1）适合中药指纹图谱研究的色谱柱推荐之T3

XSelect™ HSS T3，采用三官能团键合，低配基密度（~1.6 μmol/m2）C18 烷基链键合和ZL的封端技术，是沃特世公司最先进的键合和封端技术的有力体现。

• 在增强极性化合物保留能力的同时，维持了对中等和强疏水化合物的适度保留能力，又称“平衡柱”，能够对同时包含强极性和疏水性的复杂中药组分提供适中的保留。
• LC-MS兼容
• 耐受100%水相流动相
• 分离重现性好

对应的UPLC^®色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3，典型应用如国家药典委员会公示的护肝胶囊、护肝颗粒含量测定，用ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×100mm，1.7μm）分析，要求理论板数按五味子乙素峰计算不低于150000。

（2）适合中药指纹图谱研究的色谱柱推荐之Shield RP₁₈

Shield RP₁₈色谱柱基于沃特世ZL的内嵌极性基团技术，能够“屏蔽”（shield，英文有“护罩” 、“ 屏蔽” 的含义）硅胶表面的残留硅醇基，使其不能与碱性较大的化合物发生拖尾作用。Waters Shield技术在硅胶颗粒和BEH颗粒上均高度成功，SymmetryShield RP₁₈色谱柱在pH2-8范围内提供独特选择性，峰形与分离度都显著改善，并且完美兼容高水相条件；而BEH Shield RP₁₈更将此诸多优势拓展到pH2-11的宽范围，为方法开发提供了极大灵活性。Shield RP₁₈对含有生物碱、极性组分等中药体系都是良好的选择，更有相对应的ACQUITY UPLC色谱柱为获得超高分辨率和实现快速分离提供保障。