1.标本采集男性患者可取泌尿生殖道分泌物、前列腺液、精液定量培养可取初段尿、中段尿。女性除宫颈和阴道拭子外羊水、尿道分泌物也可用于检测。若要测特异性抗体，可采集血液标本。标本采集后应尽快送检，一般不超过3h因支原体无细胞壁，对干燥特别敏感且代谢产物积累不利于其生长繁殖。
支原体的实验室诊断有培养特异性抗体检测、代谢抑制试验、DNA探针和PCR技术等，以培养最为可靠，PCR技术最为敏感。
2.分离培养按患者性别和病变部位不同分别在无菌条件下采取不同的标本，立即接种于液体培养基中。液体培养基颜色发生变化时就转种到固体培养基。
3.特异性抗体检测生殖支原体感染部分患者可测出抗体，但敏感性不高，重复性差未能用于临床。采用ELISA法可检出解脲脲原体的IgM和IgG抗体，较敏感，特异性强有早期诊断意义。
4.DNA探针技术此法敏感，因需同位素，难以推广应用。
5.PCR技术由于其敏感性高，特异性好，现已从实验研究阶段进入临床应用阶段。逐步成为临床快速诊断的重要手段。
6.内镜检查，可直接观察泌尿生殖系统炎症病变。
