活细胞直接观察实验

细胞

相差聚光器 相差接物镜

一、相差装置的使用

相差装置或显微镜都由两个主要部分组成：相差聚光器和相差接物镜。

在每个相差接物镜的光学系统中都有一个光环透镜；在聚光器里有数个可转换的相位板，一定倍数的接物镜使用时需与相应的相位板一致。相差观察时对照明要求严格，光轴要对正，视野照明光度应均匀。

1.  工作步骤

（1）先调好相位板，使聚光器相位板号与接物镜放大倍数（相位板）相一致；

（2）然后抽出接目镜，再换辅助望远镜，移动辅助镜筒并调整聚光器相位板，使视野中两个大小一样的光环（如不同说明倍数不一致）必须相互吻合；

（3）再重新换上原接目镜，即成相差图像；当更换不同倍数接物镜时，需按上述过程重新调节。

二、细胞

培养细胞生长在瓶底上，最适用倒置光相差显微镜观察，而且需附有长焦距集光器，才能观察厚度较大的培养瓶皿。

培养瓶壁厚度都＞20 μm，只限于用40×接物镜，若用油浸镜观察细胞更微细的结构，需用支持物培养法；把细胞培养在长形盖片上。

观察时从瓶中取出制成临时标本，其方法如下

1.  取一大型载物片，另取小块优质滤纸剪成长方窗形，置于载物片上；

2.  用吸管向纸框中滴数滴培养液，使之充满框内空间和浸湿纸框；

3.  把生长有细胞的盖片担在纸框中（令细胞面向上），再覆以大盖片。

一、相差装置的使用

1.  对培养瓶、皿要求

相差显微镜观察要求底物要平坦、质地均匀、透光度好；一般玻璃瓶凹突不平不适做相差观察和摄影，用质地均匀的塑料培养瓶最好。

2.  准备

观察和摄像前要擦净培养瓶面，勿使残留污迹影响透光度。

3.  调光

调整照明光的照明度和光轴，令视野照明均匀。对正光轴是显微摄影的重要条件，忽视时不易获理想效果。

4.  在无自控摄像装置初次拍摄时，应把放大倍数、照明强度和曝光等条件一一记录下来；做一组不同曝光时间的试验，显影后选最佳组合，作为以后再拍摄时的标准。

二、细胞

1.  观察时液体不断蒸发，应随时从标本侧方滴加营养液；但不宜过多以防液体漫过上方大盖片，影响油浸观察和摄影。

2.  本法只限短时间观察细胞之用；在使用加温载物台对维持细胞功能更好，但能观察2 小时左右，观察时间过长，随培养液蒸发、pH改变，细胞形态和机能状态都将发生改变。