流式细胞仪在医学研究与检验工作中的应用(3)

　24流式细胞仪在白血病中的应用

　　241FCM在白血病免疫分型上的应用目前，世界各国科学家都提出白血病分型应采用MIC分型，它包括了形态学、免疫学及细胞遗传学3种分型方法。而通过FCM进行的免疫学分型已是传统形态学检查的必要补充。免疫学分型就是根据白血病细胞的膜表面标记和胞浆内抗原来分析其表现型，确定细胞的来源及判断白血病的亚型［9］。

　　FCM最大的优点是设门（gating）。白血病免疫分型中，最初 是评价所有细胞的免疫表型，最后再分析门内的异常细胞。我们可以采用三色荧光标记技术，以 SSC/CD45 双参数设门进行白血病或淋巴瘤免疫分型。CD45是人类白细胞共同抗原(LCA),它的非局限性标记仅存在于人白细胞中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞表面，红细胞和血小板无此表位。在成熟白细胞中CD45表达的荧光强度高于原始/幼稚的有核白细胞，而成熟白细胞中淋巴细胞表达的荧光强度最强，中性粒细胞表达最弱。SSC是流式细胞仪中代表细胞内颗粒密度的参数，细胞内颗粒密度越高，SSC越大；反之亦然［10］。用三色法及这种方式设门可以更有效地鉴别异常与正常细胞群，分析门中异常细胞群占细胞总数的百分比及其表达的抗原，对白血病的判断与分型意义较大，对于一些混合性白血病患者来说，FCM检测比形态学或组化染色得到的结果更客观，更精确。

　　242流式细胞仪在白血病患者治疗及监测中的应用

　　①检测化疗效果：FCM能通过白血病细胞的细胞周期以动态观察白血病的化疗效果。DNA非整倍体的消失可作为白血病细胞被杀伤的标志，也可作为判断疗效的标准之一［11］。

　　②监测预后：通过检测白血病患者外周血和骨髓的DNA指数(DI)、RNA指数(RI)和变异指数(CV)，3项指标来判断预后，如果3项指标持续异常，或存在一个以上的白血病克隆（尤其是血和骨髓中同时出现），则提示预后不良。而且，若同时测定两种或两种以上的细胞表型，可增加判断预后的意义。

　　③微小残留病变（MRD）检测：MRD是白血病复发的主要根源，FCM高特异性与敏感性可以在患者缓解期检测是否有残留病变细胞，早期探测MRD，在复发的预防及监测方面有重要意义。

　　25流式细胞仪在血栓或出血性疾病中的应用

　　251血小板功能的检测血小板活化程度可由血小板膜糖蛋白(GP)表达水平的高低来判断。FCM测定GP的表达情况以成为检测血小板功能的一种新方法。血小板活化时其质膜糖蛋白较其静止期发生很大变化。FCM用于分析血小板或血小板亚群GP，此外，FCM还可通过单抗免疫标记(GPⅡb/Ⅲa,CD62,CD63等)检测血小板功能及活化情况，有利于血小板无力症、巨大血小板综合征及血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。

　　252血小板相关抗体的测定FCM可以通过荧光抗体标记测定血小板抗体含量，直接测定血小板表面的相关抗体；间接法可测定血清中的相关抗体。利用FCM对血小板相关免疫球蛋白(PAIg)的检测对免疫性血小板减少症的诊断具有一定的价值。