流式细胞仪在检测循环肿瘤细胞CTCs上的应用

实验设计

CTCs在患者血液中的含量非常稀少，大约每10⁶~10⁷个白细胞中仅1个至几个CTCs存在，灵敏度一直是其检测及应用的主要障碍。在众多文献报道中，人们常利用肿瘤细胞掺入试验评价CTCs检测方法/系统的灵敏度、特异性、准确性、重复性等指标。

本研究选用高表达EpCAM的结肠癌细胞株（SW620）作为掺入细胞（图1），第一部分将不同数量（0～256个）SW620细胞掺入到1×10⁶个正常人PBMCs中，用ACEA Quanteon流式细胞仪检测SW620细胞的实际个数，确定仪器检测CTCs的灵敏度。

一、SW620细胞表面EpCAM表达鉴定

图1. SW620细胞表面EpCAM表达鉴定。将新鲜血（2mL）或掺有SW620细胞的新鲜血（1000个/2mL）用Ficoll-Paque PLUS淋巴细胞分离液（GE healthcare,17-1440-02）分离PBMCs后，在以上样本以及单独SW620细胞中分别加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗体孵育，设同型抗体对照，在ACEA Quanteon流式细胞仪上测试，数据采用相同设门策略分析。a. SW620细胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗体染色的结果； b-d. SW620细胞、新鲜血和掺有SW620的新鲜血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗体染色的结果。

二、ACEA Quanteon可检测到10⁶个正常人白细胞中的1个肿瘤细胞

图2. 灵敏度分析。收集对数生长期的SW620细胞，标记 EpCAM-APC荧光抗体，设同型抗体对照，冰上孵育60min，用含0.5%BSA的D-PBS洗两遍；将染色后的SW620细胞按0，2，4，8，16，32，64，128，256，512个（体积20μL）分别掺入2×10⁶个PBMCs（体积180μL）中，涡旋混匀（理论上，每100μL中含SW620细胞数：0，1，2，4，8，16，32，64，128，256），在ACEA Quanteon流式细胞仪上中速采集100μL，记录EpCAM+细胞数量。A. 设门策略。FSC-SSC散点图上设P1门去除碎片和杂信号，基于P1门，在散点图上表现为EpCAM+的细胞即为掺入的SW620细胞；B. ACEA Quanteon流式细胞仪上的测试结果；

结论
ACEA Quanteon流式细胞仪检测结果显示，在不同细胞数量掺入水平，实际检出细胞数量与理论数量之间呈现良好的线性关系，灵敏度为0.0001%，即可检测到10⁶个正常人白细胞中的1个肿瘤细胞，证明ACEA Quanteon流式细胞仪在检测CTCs方面具有高灵敏度。

参考文献

[1] 循环肿瘤细胞检测与临床应用进展。赵倩雯，司徒博，郑 磊。南方医科大学学报, 2017, 37(10): 1423-1426

[2] 循环肿瘤细胞的研究进展。王宜文，胡孔旺。安徽医科大学学报，2017，52(12)：1897-1900