流感疫苗生产的纯化过程:
1. 已培养好的带病毒的鸡胚用75%酒精消毒;
2. 收集鸡胚尿囊液:根据鸡蛋大小收集量略有不同(每只6-10ml);
3. 尿囊液初滤JST型10μm滤芯过滤;
4. 连续流离心机或超滤系统过滤
a. 连续流离心机:日立R13C,用12,000rpm,流量:每分钟600-800ml,除去杂质,上清液用于透析浓缩;
b. Millipore超滤系统,0.45μm滤膜,除去杂质
5. 尿囊液的透析浓缩:用Millipore超滤器,1000KD膜包浓缩,浓缩后通常为尿囊液量的1/30;
6. 超速离心的病毒纯化(略);
7. 福尔马林脱毒;
8. 乙醚裂解;
9. 100KD透析脱糖;
10. 去福尔马林;
11. 去乙醚……
12. 几种流行病毒抗原的混合(如H1N1+H3N2+H2N2)和稀释
13. 加入稳定剂
14. 成品
离心纯化需要准备的仪器和基本材料:
1. 仪器
a. 阿贝折射仪 Abbe refractometer (测蔗糖浓度)
b. Cole parmer 软管泵:KH-77913-25
c. 紫外分光光度计或核酸蛋白分析仪(有280nm,260nm波长的),可以是带流动池及记 录仪,也可以是带标准样品池的)
2. 梯度液
a. PB缓冲液PH7.3
b. 30% w/w蔗糖液(Sucrose,Sigma,AR级)
c. 55% w/w蔗糖液
d. 58% w/w蔗糖液
3. 实验器具
a. 50ml有刻度玻璃管 100支
b. 500ml有刻度烧杯 5支
c. 100ml有刻度烧杯 5支
d. 1000ml有刻度量筒 3只
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