流感病毒的形态及实验室分离纯化

引起人类流感的病毒是冠状病毒。冠状病毒只感染脊椎动物。
感染流感病毒后会引起人与动物的呼吸道、消化道与神经系统病患。
流感病毒的代表型在上世纪 60年代被查明， 60年代后对各种流感病毒的完整形态已进行了深入研究。冠状病毒的基因图谱序列（包括各种蛋白酶和病毒内部的核甘酸序列）已被查明。
流感致病病毒几何尺寸：平均直径 100～200nm沉降系数约为 700S~800S。
病毒（全病毒）在蔗糖液中浮密度约为 1.15～1.19g/ml
病毒形态：近似球形，中心部分核酸，最外部为纤突，是血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的大分子，它附着在具有保护作用的脂质膜上，纤突是病毒侵害人体细胞时附着道细胞上的吸附器，也是中和抗体的抗原。这二种表面抗原可以独立或同时发生变异。 HA的变异性很强，是流感发生变异的主要原因。脂质膜内依次是膜蛋白、螺旋壳膜子粒、核酸链。
核酸：流感病毒的核酸为双股线型 RNA，同种冠状病毒的核酸序列是恒定的，但病毒发生变异后，核酸与蛋白的序列会发生某些微小变异。
病毒如何侵入人与动物细胞：纤突吸附到细胞膜上→病毒 RNA进入人体寄主细胞→病毒核酸复制→病毒蛋白合成（包括病毒壳膜及子粒），病毒的 RNA既可以直接作为 mRNA也可以转录形成一个互补的 RNA股。病毒进入寄主细胞后其信息通过人体细胞生物合成机制提供产能系统、核蛋白体、氨基酸活化酶、 tRNA和其他成分来指导合成一系列病毒蛋白。接着，病毒自身作为复制模板在特异聚合酶作用下复制，并用上述由病毒核酸指导合成的病毒蛋白集合成壳膜，组成一个新的病毒颗粒。
流感病毒由多个基因组片段分节段构成，在感染细胞时，病毒基因组片段可发生重组。产生数百种遗传学不同的重组子病毒亚型。这些重组病毒亚型具有父母代双方的 RNA片段，而且多种不同的抗原变异株或重组子病毒可同时在脊椎动物中循环存在，在适应过程中通过基因重排，交换或功能互补使其致病力发生改变，从而导致新的流行病毒株的出现。
全病毒分离纯化：培养液经层析、超滤或高速连续流离心得到浓缩全病毒的上清液。小容量可用超速离心机，最高转速为 40,000rpm的甩平转头，10～50％或类似蔗糖梯度作等密度离心 30,000rpm~35,000rpm，1～2小时，5℃。病毒应沉降在 30％～40％蔗糖梯度之间的某个位置形成纯病毒区带。用密度梯度仪（如日立 DGF-U）把管中液体自上而下用管道泵自动抽样接至分光光度计流动池进行光密度连续检测，经部分收集器分部收集并给出从管上部液面到管底的容量——光密度曲线，从曲线的尖峰位置确定病毒所在的收集离心管编号（每个离心管分批收集成 50～100管）。经透析及其他处理后得到纯病毒浓缩液。
病毒裂介后纯化处理：用 Triton X-100或乙醚裂介后高速离心浓缩抗原蛋白，然后用超速离心机作密度梯度离心纯化。
中试和批量生产：根据生产规模可用低速大容量离心机或高速管式离心机或高速离心机高速连续流转头、大容量层析、超滤设备、超速区带离心，超速连续流离心直至大容量超速连续流离心机作最后分离纯化。