要得到合适的信号强度,可根据 DNA 片段的大小调节 DNA 的用量。适用于 ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 和 GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 热循环仪。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
| 剂、试剂盒 | 循环测序试剂盒引物和模板 |
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| 仪器、耗材 | 薄壁 PCR 管热循环仪GeneAmpPCRSystem9700 仪 |
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| 实验步骤 | 一、材料
1. 缓冲液和溶液
ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 或其他循环测序试剂盒
2. 核酸和寡核苷酸
引物和模板
3. 特殊设备
DNA 扩增用薄壁 PCR 管
热循环仪,GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 仪或相当产品
二、方法
1. 将适量(如上所述)的引物和模板加入到 PCR 管中。
2. 每管加入 4ul Terminator Ready Reaction mix。
这是说明书中推荐用董的一半,这一用董已经足够,而且节省试剂。
3. 用去离子水补至 20ul, 混匀,稍离心。
4. 在 GeneAmp PCR System 9700(Applied Biosystems) 或相当产品的仪器上,执行下列程序。
 5. 上步反应结束后,反应产物可立即纯化或-20°C 保存以备将来纯化。
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