液体闪烁计数器与分光光度计测定蛋白含量的比较研究

蛋白质含量的比色测定，是在分光光度计上完成的。1983年Noble用液体闪烁计数器(液闪仪)测定蛋白含量。l988年强美玉做了分光光度计测定浓度范围内的研究。我们用Lowry和Bradford蛋白含量测定法，对液闪仪和分光光度计测定蛋白浓度范围，准确度，重复性和稳定性进行了比较研究。并用液闪仪测定了102份人精浆蛋白和31份人血清蛋白样品。

1 材料和方法

1．1仪器FJ-2107型液闪仪(西安二六二厂)
260型可见紫外分光光度计(日本岛津)。

1．2密封放射源在直径0．3cm，长3cm的玻管内加入H-雌二醇和甲苯闪烁液，烧封管口。平均放射计数为60016±120／6秒(n=15)。

1．3蛋白测量装置将3ml显色后的蛋白测定液置于测量套瓶中，放射源微管竖插于被测液中，测量套瓶放人闪烁瓶内。

1．4液闪仪测定蛋白含量的原理放射源产生的光子，被有色的蛋白测定液淬灭，淬灭程度与蛋白浓度成比例。制备放射计数对蛋白浓度的标准曲线，即可进行蛋白定量测定。

2 结果

2．1标准曲线Lowry(蓝色)和Brdaford(棕色)测定液，低浓度时，液闳仪和分光光度计测定标准曲线均为直线。随着蛋白浓度的增加，标准曲线弯曲，改用放射计数对蛋白浓度的对数作图，标准曲线呈直线。放射计数与蛋白浓度，蓝色测定液成正比，棕色测定液成反比。

2．2液闪仪与分光光度计测定蛋白浓度范围比较。液闪仪比分光光度计测定蛋白浓度范围宽12倍(蓝色)和60倍(棕色)。见表1。

2．3液闪仪与分光光度计测定准确度比较标准蛋白液显色后用液闪仪和分光光度计测1o次，其均值与标准蛋白浓度比较。见表2。

2．4液闪仪与分光光度计测定重复性比较低和高浓度蛋白液显色后用液闪仪和分光光度计测定，以批内和批间变异系数(CV)比较。见表3。

2．5液闲仪与分光光度计测定稳定性比较标准蛋白液显色后于不同时间内用液闪仪和分光光度计测定放射计数和吸光度。低浓度，8小时内无显著性差异(>0．05)；高浓度24小时内无显著性差异(P>0．05)。

2．6液闪仪与分光光度计测人精浆蛋白含量比较102份人精浆蛋白(I—owry)~31份人血清蛋清(Bradford法)显色，液闪仪和分光光度计测定的蛋白含量值相关良好(r=0.974)，配对t检验无显著性差异(P>O．05)，见表5。

3 讨论

我们的结果显示，液闪仪测定蛋白的浓度范围比分光光度计宽l2～60倍，测定的重复性、稳定性和准确度可与分光光度计媲美。我们改进Noble法：①改测定装置使测定液由16ml减到3ml；③改用能量低、价格低，效果好的。H放射源；③对高浓度曲线进行了对数转换，实现了高浓度蛋白样品的准确测定。我们利用现代液闪仪先进的样品和数据处理系统，使测定简单、准确、自动化，同时叉拓宽了液闪仪的用途。