液相色谱仪分析提取含有胭脂红色素的样品

用液相色谱仪提取含有胭脂红色素的样品，用高效液相色谱仪对样品进行分析，并与红宝石的紫外可见光谱进行比较，进一步验证。

一、仪器设备

高效液相色谱仪，配紫外检测器；

紫外分光光度计；

电热恒温水浴锅；

旋转蒸发器。

二、试剂与材料

胭脂虫红；

甲醇，色谱纯；

重蒸去离子水；

硫酸和乙酸铵，分析纯；

三正辛胺，分析纯。

三、标准溶液配制

准确称取胭脂虫红对照品50.0 mg于100 mL容量瓶中，用重蒸去离子水溶解定容，配成0.50 g／L的标准溶液储备液。

四、样品前处理

用水重复洗涤约20 g的样品，洗涤溶液作为样品溶液。以肉制品为原料，经研磨机将油脂除去三次，加入90毫升无水石油醚，再用热水提取三次，并用组合提取液作为样品溶液。将样品溶液放入分离漏斗中，加入2mL浓盐酸，加入10 mL三辛胺正丁醇溶液(体积积分为5%)中，用摇床反复提取3次。有机相浓缩至10毫升，用10毫升饱和硫酸钠溶液洗涤两次。在分离漏斗中加入50 mL正己烷，用2%(体积分数)氨水萃取3次，取解吸液5mL，收集解吸液，加入乙酸，在减压(40&deg；C以下)下蒸发至干燥，加入水溶解至5mL，过滤膜(0.45μm)，将20μl加入高效液相色谱仪。

五、色谱条件

色谱柱：XB—C18（4.6mm×250mm，5um）；

流速：1.0 mL／min；

进样量：20ul；

流动相：0.02 mol／L乙酸铵和甲醇；

梯度洗脱程序：甲醇20％～35％，0～5 min；

35％～98％，5～10min；

98％，保持6 min；

柱温：25℃；

检测波长：280nm。