液相色谱仪测定土壤中的苯胺类污染物

苯胺类化合物是土壤中常有的有机污染物。苯胺类化合物常见于印 染、制药等土壤中，苯胺类是一种重要的有机化工原料，环境中的苯胺主要来源于橡胶、印染、制药、塑料、陶器上釉等工艺生产过程。环境中苯胺的残余量已引起 人们的极大关注，早已将其列人优先监测的污染物。主要引起高铁血红蛋白血症和肝、肾及皮肤损害。眼睛接触：可出现结膜角膜炎。皮肤接触：可引起皮炎。因此，建立简单、快速、灵敏、有效的苯胺类测定方法十分必要。

1 实验部分

1．1 仪器和试剂

1．1．1 仪器

Agilent 1200液相色谱仪；

色谱柱：Ultimate XB-C18  4.60×250mm,5 um .

1．1．2 试剂

1) 苯胺、邻硝基苯胺、间硝基苯胺、对硝基苯胺、2，4一二硝基苯胺、

2，6一二硝基苯胺、3，5一二硝基苯胺为色谱纯标样。

2) 二氯甲烷、丙酮、乙睛等均为色谱纯试剂。

3) 氢氧化na、盐酸均为分析纯试剂。

4) 无水硫酸钠为分析纯试剂，用前在马弗炉中350烘4 h。

5) 氟罗里硅土100～200目色层分析用，进口分装，400℃下烘2h，置干燥器中备用。

1．2 样品制备

1．2．1 土样预处理

将土壤样品风干、研磨后过筛，称取土壤20g，加适量硅藻土拌匀，填人萃取池中，若萃取池中仍有空间，则用硅藻土填满,萃取。取下样品萃取液，于38℃用氮吹仪进行浓缩至lmL，待净化。

1．2．2 样品净化

苯胺类的预分离和浓缩：称取含水量10％的氟罗里硅土6g，制成环巳烷浆液，湿法装入内径为lOmm的玻璃柱中，新装好 的色谱柱应用二氯甲烷和丙酮冲洗数次，然后将预浓缩过的萃取液通过此玻璃柱，再用2mL的环巳烷洗K—D浓缩瓶三次并通过层析柱，用30mL二氯甲丙酮洗 脱液浸泡层析柱，再用30mL洗脱液洗脱柱中苯胺类，全部洗脱液接入氮吹瓶中于氮吹仪中浓缩定容到预定体积1mL，用Welchrom Syringe Filter Nylon 13mm 0.45um (Part Number:00802-02202,Lot Number:140108)过滤器对浓缩样品进行过滤，将此萃取液按下面色谱分析条件进行分析测定。

1．3 色谱分析条件

流动相为70％0．05mol／L乙酸胺缓冲液加30％乙睛，流速为0．8 mL／min；紫外检测器，鉴定波长为285 nm；进样量10 uL。色谱柱温l6℃。

1．4 标准曲线的绘制

首先以甲醇为溶剂将苯胺类7种单标用重量法配制，充分溶解后，再分别量取一定体积混合成中间储备液后逐级稀释后液浓度见表1。

表1  苯胺类各成分混标的浓度

将以上苯胺类标准液依次测定后，绘制标准曲线见表2。

                    表2 苯胺类各成分标准曲线

1．5 定性和定量计算

利用保留时间定性，利用苯胺类混合标准样品做为外标，利用峰面积进行定量计算。

2 结果和讨论

2．1 色谱条件的确定

2．1．1 流动相的选择

因此选择70％0．05mol／L乙酸铵缓冲液加30％乙睛做流动相。其色谱图见图2。

图l 65％0．05mol／L乙酸铵缓冲液和35％ 甲醇流动相

(1一苯胺、2一邻硝基苯胺、3一间硝基苯胺、4一对硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺与7—3，5一二硝基苯胺)

图2 70％ 乙酸铵缓冲液和30％ 乙睛流动相

(1一苯胺、2一邻硝基苯胺、3一间硝基苯胺、4一对硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺、7—3，5一二硝基苯胺)

2．1．3 柱温的选择

参考本地气温的变化规律，选择16℃作为该色谱柱的适宜温度。

2．1．4 准确度、精密度和检出限

依据美国EPA SW一846中规定的方法检出限，连续分析7个接近检出限浓度的实验室空白加标样品，分别在7个20g空白土壤中加入苯胺类混标，计算其标准偏差S，再依据公式MLD=St_{( n-1,0.99)}计算出检出限，在99％的置信区间，7个分析值的偏差均非常小，S=0.012-0.032，此时，t_{（6．0．99)}=3.143，其中，为

t_{( n-1,0.99)}是置信度为99％、自由度为n一1时的t值；其中n为重复分析的样品数。

经实验确定，取7个20g空白土壤，分别进行7次低浓度加标回收测定，加标量为表1中浓度按苯胺类混标100uL的平均加标回收率为63.8％ -92.7％，相对标准偏差(RSD)≤4．8％。其检出限与回收率结果见表3。