液质联用法对人血浆中冰毒海洛因K粉等9种毒品的检测

苯丙胺类兴奋剂包括苯丙胺、甲基苯丙胺冰毒、3，4-甲二氧基苯异丙胺、3，4-亚甲二氧基甲基安非他明等，具有兴奋中枢神经和周围神经、抑制食欲、致幻等作用，并存在与氯胺酮混合使用情况。吗啡类生物碱主要包括海洛因、吗啡、6-单乙酰吗啡和可待因止咳水等滥用药物。世界反兴奋剂机构明确规定这些都是运动员需要避免的违禁物质。

另外，公安部《对吸食、注射毒品人员成瘾标准界定》的规定指出，凡查获吸食、注射毒品者，应进行毒瘾司法鉴定和吸毒违法行为的认定。同时，一些吸毒死亡案件中需要对血液进行毒品化合物定性定量分析；交通事故中驾驶者涉嫌服药后的血液毒药物分析等，这些都需要建立灵敏、准确可靠的血液中常见毒品化合物定性定量检测方法。

目前，常见的生物检材有血液、尿液、头发等，检测仪器多为气相色谱仪（GC）、气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）、高效液相色谱仪（HPLC）、高效液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）等。无论使用何种检材和检测仪器，大多以化合物保留时间、特征碎片离子为指标来定性鉴别。相对于尿液和头发，血液样本存在更多的内源性物质，使得质谱检测中有大量的碎片离子信号干扰，以及在化合物保留时间附近时常出现的“鬼峰”，容易产生假阳性，仅使用上述指标还是难以准确定性鉴别。

另外，虽然关于血液中这9种毒品的液质检测方法有文献报道，但都是检测单一化合物或者某一类化合物，尚未见到关于多个和多类毒品化合物同时筛查检测的文献研究。而本研究建立了一种同时对血液中吗啡类、氯胺酮和苯丙胺类等9种毒品化合物进行快速、准确定性定量检测的超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）。实验采用浓度为10%三氯乙酸直接沉淀蛋白来处理血液样本，较之文献中的液-液萃取法和固相萃取法，更加简单快速，提取液不需浓缩复溶，避免了过多中间环节的引入造成系统误差；且成本低，适合大批量样本检测。处理后的样品由超高效液相色谱-质谱仪检测，没有气相色谱-质谱法中的衍生化步骤，也比一般的高效液相色谱-质谱法灵敏，准确度更高，检测周期更短。

招募6个健康志愿者，早晨空腹抽取空白血液，置于加有肝素钠抗凝剂的离心管中，取上清放入−20℃冰箱冷冻保存。

9种化合物的一级质谱分析显示，在ESI正离子模式下都容易得到一个H+，形成较为稳定的[M+H]+准分子离子；通过调节质谱的锥孔电压值（Cone）和碰撞能量（CE）值，9个化合物都会产生多个碎片离子，故每个化合物在筛选时各选取两个特征离子对进行分析，并进一步对其Cone值和CE值进行优化，使离子对响应值最佳。定性分析检测选取两个离子对；定量分析检测选取分子离子峰响应值最高的离子对。

本在预实验中分别考察了甲醇、乙腈、10%三氯乙酸沉淀蛋白处理血浆样品，结果显示前2种方法处理空白血浆后的提取液检测色谱图中会出现吗啡类化合物峰，表明内源性物质对检测有干扰。采用10%三氯乙酸沉淀蛋白后测定，空白血浆提取液色谱图中没有干扰；同时通过调节流动相比例梯度洗脱，让待测化合物在2min后出峰，前段时间洗除内源性物质，降低了基质效应的影响，准确度较好。

取空白人血浆200uL，分别配制9种化合物低、中、高质量浓度的质控样品，按血样处理方法进行处理。每个质量浓度5份同日测定，得日内精密度；连续测定3天，得日间精密度。以当日的随行标准曲线计算样品的测定质量浓度，与配制的质量浓度对照，求得方法的准确度。将质控样品与空白血浆提取后加入标准品溶液后进样测得的峰面积相比，考察方法的提取回收率。结果表明，9种化合物的RE<15%，准确度良好；日内、日间精密度（RSD）均<18%；相对提取回收率均>60%，RSD%均<15%。

考察9种化合物的低、中、高质量浓度样品经处理后在仪器自动进样室10℃12h内的稳定性。结果表明，经处理后的9种化合物待测样品在上述条件保持稳定，RE%均小于20%。

本研究考察了9种化合物各自在不同的浓度下分子离子峰丰度比，发现丰度比值近似恒定，从量的角度排除了内源性物质和系统色谱“鬼峰”的干扰，是一个非常准确可靠的专属性很强的定性指标。故可用保留时间、特征碎片离子峰及分子离子峰丰度比为指标来定性鉴别血液样品中这9种常见毒品，同时也为生物样本中其他类别药物化合物的定性鉴别提供参考。另外，本文方法学考察结果表明，准确度、线性、提取率和精密度均良好，检测限和定量限在ng·mL-1级，能够对血液样品中这9种毒品进行准确定量测定。

综上，本实验建立的人血浆中吗啡、可待因、海洛因、氯胺酮、6-单乙酰吗啡、3，4-甲二氧基苯异丙胺、3，4-亚甲二氧基甲基安非他明、苯丙胺、甲基苯丙胺的超高效液相色谱-质谱法具有分析时间短、操作简便、准确度和灵敏度较高、重复性好等特点，在10min内可完成一个样品多个成分的定性定量分析，适合大批样本，成本低、能够满足实际检测需要。另外，目前常见毒品除上述9种外，还包括美沙酮、氢化吗啡、氧可酮、大麻类等，以及一些新型毒品，以后实验室将继续对这些化合物的检测方法进行研究。