淋巴细胞的分离和激化

全血

肝素 葡聚糖 PBS Ficoll-Hypaque

离心机

1. 收集 10 ml 全血，加入不含防腐剂的肝素（0.2 ml 肝素/10 ml 全血）。

2. 在 15 ml 离心管中的肝素化血中加入 1 ml 6%葡聚糖，室温放置 20~30 分钟，沉降红细胞。

3. 从葡聚糖处理的血中小心收集红细胞上层的富含白细胞的血浆。

4. 富含白细胞的血浆室温 300 g 离心 8 分钟，沉降细胞。

5. 弃上清，细胞轻悬于 1 ml PBS 中。

6. 于室温下，用无菌巴斯德吸管小心将细胞悬液加在 5 ml Ficoll-Hypaque 之上。

7. 400 g 低温（4℃）离心 30 分钟，沉淀细胞。

8. 淋巴细胞在血浆和 Ficoll-Hypaque 层之间的白色浑浊条带中，小心取出贮存。弃红细胞沉淀。

9. 5 ml PBS 洗一次细胞，室温 250 g 离心 5 分钟，沉淀细胞悬于 3~5 ml 生长培养基中。

10. 全部细胞悬液转移至 T-25 组织培养瓶，加促细胞分裂剂。