激光全息技术检测细胞凋亡

如何检测细胞凋亡？

细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

细胞凋亡的研究方法

一、定性和定量研究

只定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）

进行定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。

二、区分凋亡和坏死

可将二者区分开的方法：琼脂糖凝胶电泳，形态学观察（透射电镜是是区分凋亡和坏死最可靠的方法），Hoechst33342/PI双染色法流式细胞仪检测，Annexin-V/PI双染色法流式细胞仪检测等。

不能将二者区分开的方法：原位末端标记法、PI单染色法流式细胞仪检测等。

激光全息技术检测细胞凋亡

M4激光全息成像及分析系统采用激光穿透细胞形成干涉条纹，由计算机转化为3D图像，通过对活细胞与死细胞不同的折射率分析细胞凋亡过程。真正实现细胞非损伤、非标记、非侵害性保证细胞最真实的生长状态，免去对细胞进行显微镜观察时的前期处理伤害，节省时间，操作简单。是结合定性和定量的新型研究技术。

实时检测细胞凋亡的过程

1) HoloMonitor M4体型较小，可以将其放置于细胞培养箱中，细胞培养皿中无需做其他处理，直接置于HoloMonitor M4显微镜，即不改变细胞培养的条件、同时对细胞进行实时监控分析，清晰区分细胞坏死和细胞凋亡，对于细胞凋亡过程中细胞的体积变小、胞质浓缩，卷曲、核染色质凝聚。染色体断裂成片，最后形成凋亡小体，被吞噬细胞消化，融合等这些形态学的变化。以下是观察前列腺癌细胞DU145的凋亡图片。

2) HoloMonitor M4分析系统可以对细胞在不同时间及不同的凋亡过程进行形态学参数的分析，统计凋亡细胞数量的变化，真正做到了对细胞非侵入、非标记的细胞凋亡的定量分析。

3) 目前毒理学，肿瘤学，胚胎学，心血管疾病，神经退行性病变， 炎症， 免疫系统疾病， 药物治疗，神经系统发育等研究都涉及到细胞凋亡的研究。

在药物筛选方面，为验证药物的药效，可以对细胞不同处理后观察细胞凋亡率来计算IC50值来反映新药物的疗效。上图是经etoposide不同浓度的处理后通过散点图表示细胞的凋亡情况及细胞死亡数量的统计。