激光共聚焦显微镜的显微镜系统

显微镜系统

　　荧光显微镜是激光扫描共聚焦显微镜的一个重要组成部分。它配备两个光源：卤素灯光源和汞灯光源，主要是用于预览样品，其中卤素灯光源用于寻找样品焦平面、观察样品位置、形态和分布；汞灯用于观察和分辨样品中产生荧光物质的成分和位置。对于光敏（例如淬灭）的样品最好用卤素灯进行预览，以减少对样品的刺激。激光共聚焦显微镜系统所用的荧光显微镜大体与常规荧光显微镜相同，但是又有其特点。

　　（1）激光共聚焦显微镜系统中，其侧面打开了一个于扫描器相连接的接口，使激光能够由此进入显微镜的物镜照射到样品上，并使样品发射的萤光到达检测器。

　　（2）荧光显微镜的载物台上装有微量步进马达，以驱动载物台在垂直（z轴）方向移动，用于共聚焦显微镜获取不同层面光学切片，这些光学切片是共聚焦显微镜获取三维荧光图像的基础。Z轴步距的大小决定了光学切片的厚度，而z轴的步距是由实验者输入相应的指令来控制的。

　　（3）用高倍镜观察样品尤其是进行动态监测时，最好配备倒置显微镜，以便适应多种样品的观察，例如Petri 皿中培养的细胞样品。

　　（4）荧光镜座要装有防震动的装置，防止在激光扫描样品、采集图像过程中发生载物台在任何方向上的移动。

　　（5）装有光路转换装置。预览时使用汞灯作为激发光，样品发射的荧光进入目镜或照相系统；正式采集共焦图像时用激光光源激发样品，发射的荧光进入扫描头中的检测器。这两套激发光源及发射光系统不能同时使用，要配备光学和机械系统进行光路转换。

　　（6）要配备高数值孔径的油浸或水浸物镜采集样品精细机构的图像。显微镜物镜镜头及光路系统均与扫描器光路系统相匹配，同时由于各种波长的激发光和荧光都通过物镜，所以物镜要保证各波长范围内的透光性。

　　(7) 汞灯光线的强度可调，以便根据样品中荧光物质的强弱及光敏的程度调节激发光的强度，保证样品在预览过程中的荧光强度不发生变化，这对于后面用共聚焦显微镜进一步准确定量很重要。

　　（8）载物台支架和附件的配备要能适应多种样品器皿和测试要求。因此需要配备相应的支架和附件。常用的样品支架有：载玻片支架、大小Petri皿支架、大小平皿支架、控温架CO2。通气装置等。

　　（9）荧光显微镜的参数要与光路系统。计算机控制软件系统相匹配。