由NAD+在激酶催化下接受ATP的γ-磷酸基团而得到。
植物叶绿体中，光合作用光反应电子链的最后一步以NADP+为原料，经铁氧还蛋白-NADP+还原酶的催化而产生NADPH。产生的NADPH接下来在暗反应中被用于二氧化碳的同化。
对于动物来说，磷酸戊糖途径的氧化相是细胞中NADPH的主要来源，由它可以产生60%的所需NADPH（又称[H]）。
