在我们的课题研究中,很多小伙伴们应该都涉及到基因功能的研究。在基因功能研究过程中,我们少不了要去给这个基因进行过表达、敲除或者敲低的操作。这样我们就需要构建表达载体(过表达,敲除或者敲低),并将构建好的表达载体转染至我们的细胞或者实验动物内,进而便可研究我们的基因在细胞或者生物体内所执行的功能和扮演的角色。
可在构建表达载体的时候 ,我们要如何选择合适自己实验需要的载体呢?载体可分为病毒载体和非病毒载体,病毒载体又分为慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体等。今天我们就来说说病毒载体中的慢病毒载体。
一、慢病毒
逆转录病毒(Retrovirus):是一种RNA病毒,在复制时需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA, 再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增。主要包括RNA肿瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三种亚科。
慢病毒(Lentivirus):属于逆转录病毒科,名称源自该种病毒长达数年的潜伏期。
最经典的慢病毒是由HIV病毒改造而来,而且HIV-1/HIV-2系统也得到了广泛的应用,除了HIV病毒系统以外,后续还有猿类免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus, SIV)载体系统、猫免疫缺陷病毒(felines immunodeficiency virus, FIV)载体系统、绵羊梅迪-维斯纳病毒(MMV)载体系统和马传染性贫血(EIA)载体系统等。
慢病毒结构:
2个调节基因:
(1)tat基因:反式激活因子,对HIV基因起正调控作用。
(2)rev基因:病毒蛋白表达调节因子,增加gag和env基因对结构蛋白的表达。
4个辅助蛋白(附属)基因:
(1)vif和vpu调节感染性病毒颗粒的产生;
(2)vpr和nef参与疾病的表现。
慢病毒的优势:
1.慢病毒携带的基因组可整合到宿主基因组,使宿主细胞长时间稳定表达外源基因;
2.可感染分裂和非分裂细胞;
3.低免疫原性,直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验;
4.可以更换特异性启动子;
5.野生型的HIV大小约为9.8 kb,插入片段可长达5-6 kb;