牙髓干细胞DPSCs的冻存与复苏

牙髓组织                                                          

灭菌PBSA                                                                  用冰预冷的冻存液I                                                                  用冰预冷的冻存液II                                                                  胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶                                                                  0.54mmol  L(0.2%)EDTA 无Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡盐溶液溶解                                                          

1.8mL冻存管                                                          

(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。

(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。

(c)在80%的贴壁细胞从培养表面脱离时，加人MSC培养基。

(d)500g离心6min。

(e)倒掉上清，用冰上预冷的冻存液I重悬细胞。

(f)细胞计数，然后稀释或浓缩细胞到终浓度的2倍。继续将装有细胞的试管放置在冰上。

(g)在冰上边转动试管边缓慢加人等体积的冻存液II。

(h)等量按份加人冻存管。

(i)将冻存管放入程控降温仪。慢速冷冻盒和-80℃冰箱也可用于降低冷却速度。将冻存管放人液氮长期储存。