独立研究证实V3western流程的优越性

　　来自澳大利亚弗林德斯大学(Flinders University)的研究人员近日在《Analytical Biochemistry》杂志上发表独立研究成果，证实了在western blotting中采用Bio-Rad stain-free技术的优越性。

　　弗林德斯大学的Alex Colella博士及其同事在文章中介绍了stain-free(无染色)方法让他们可评估电泳和western转移的质量，之后再开展western blotting的后续步骤，这样能够在更短的时间和更少的步骤内获得更准确的blot数据。

　　为了确保半定量western blotting的准确性，最重要的步骤之一是确定每块凝胶的蛋白上样量。蛋白估算不精确、移液不准确，或蛋白转移不均匀，都可导致上样误差。一般来说，研究人员依靠两种上样对照：用看家蛋白(β-actin)的抗体重新标记，或使用总蛋白染料，如SYPRO Ruby、丽春红或考马斯蓝。

　　在使用看家蛋白作为上样对照时，必须确定实验变量改变时，这个蛋白的表达水平不变。在某些情况下，与待测蛋白相比，看家蛋白的表达量有可能过高或过低;有时，在比较不同组织提取物中的特定蛋白丰度时，这些对照甚至不可用。

　　Stain-Free技术可实现蛋白分离和转移效果的实时观察。将跑完的预制胶或转印好的PVDF/NC膜放入ChemiDoc™ MP成像仪中，只需1分钟，即可对蛋白分离和转印情况了如指掌。他们的研究结果表明，stain-free方法是现有方法的出色替代，因为电泳和 western转移的质量可在抗体检测之前证实。发现每一步中的问题有利于研究人员开展troubleshooting。同时，研究人员有更多的时间来优化他们的流程，因为stain-free方法将整个流程从2天缩短至1天。

　　Chataway博士提到stain-free凝胶和SYPRO Ruby染色的表现相当，但stain-free凝胶的使用让半定量western blotting的时间缩短了1.5小时。同时，由于避免了昂贵试剂的使用，stain-free方法也降低了总成本。

　　弗林德斯大学医学院蛋白质组实验室的主管Tim Chataway认为：“我们的研究表明，Bio-Rad的stain-free凝胶可改善半定量western blotting实验的数据质量。”而Chataway博士也表示：“我们发现stain-free技术是传统方法的更快更经济高效替代，比对照上样这种方法更为出色。”