猪链球菌2型分泌性核酸酶A(SsnA)活性检测及其基因序列的克隆与测序分析

摘要: 对8 株猪链球菌2 型重庆分离株的核酸酶A 全基因进行克隆测序, 结果表明该基因长度为3 126 bp , 与Gen2Bank 发表的唯一的该基因的序列相比, 核苷酸同源性高于98% , 推导的氨基酸同源性高于94%。根据核酸酶A 基因的测序结果建立扩增片段长度为301 bp 的PCR 检测方法, 并用甲苯胺蓝DNA 酶琼脂对猪链球菌分泌性核酸酶A 的活性进行检测。检测了从病猪内脏分离的猪链球菌致病株35 株, 33 株核酸酶A 基因PCR 检测阳性(阳性比例为9413% ) , 其中有24 株分泌活性检测为阳性(阳性比例6816% ) ; 正常猪扁桃体分离株14 株, PCR 检测为阳性的10 株(阳性比例7114% ) , 其中有核酸酶A 分泌活性为8 株(阳性比例5711% ) , 检测菌株中有2 型猪链球菌44株, 38 株扩增出核酸酶A 基因的片段PCR 检测阳性并且分泌活性为阳性的有32 株, 猪链球菌1 型、7 型、9 型、13型、1ö2 型各1 株, 均能扩增出核酸酶A 基因的片段, 但只有13 型猪链球菌有核酸酶A 分泌活性。对猪链球菌在不同生长时期核酸酶活性的检测显示, 猪链球菌在培养4、8、16、32、48 h 均有核酸酶A 的分泌, 并且Ca2+ 和M g2+ 为分泌性核酸酶A 的活性必需因子。