理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证及案例

　　检测限和定量限

　　检测限定义为样品中被分析物能够检出但无需准确定量的最低量。

　　检测限常常与方法的灵敏度相混淆，灵敏度是以响应值对被分析物的浓度或质量作图所得校正曲线的斜率。

　　定量限（LOQ）定义为能够以适当的精密度和准确度对样品中的被分析物进行定量测定的最低量。定量限和检测限测定方式包括：

　　a) 视觉判断

　　通过测定待测成分浓度已知的样品，并确定该成分能被可靠检出的最低水平来计算检测限。如重金属测定法。

　　b) 信噪比法

　　通过比较测得的已知低浓度的样品信号和空白样品的信号，建立能够监测的被测物的最低浓度所得到的方法。如色谱法。

　　c) 基于空白的响应值标准偏差

　　通过分析适当数量的空白样品并计算所得响应值的标准偏差来测量分析背景响应值的大小。如光谱法。

　　检测限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果；定量限数据还应包括准确度和精密度验证数据。

　　检测限和定量限测定方法（信噪比法）示例：

　　在最灵敏的仪器状态下,测定至少四个空白样品,洗脱时间需覆盖整个样品中所有组分的流出，计算平均噪声水平；

　　然后按信噪比大于2而小于6 配制所有组分的样品溶液，每个样品进样三次,计算该组分的最小检测限；然后按信噪比等于10.0±0.5 配制样品溶液，连续进样三次计算组分的最小定量限。

　　耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据。

　　确定方法的耐用性时，使一系列的方法参数在一定的范围内变动，测定这些变动对结果的量化影响。常见的耐用性考察因素示例如下表。如果参数的影响在预先设定的允许范围内，则证实方法在该参数范围内耐用。

　　耐用性试验可以确定分析方法的关键参数及其允许的容量范围，并可以帮助评估一种或某种参数变化后方法是否需要重新验证。在方法开发阶段应考虑通过风险评估的方式确定耐用性试验因素设计，这也是“质量源于设计”（QbD）在方法开发中的体现。

　　此外，稳定性试验对于计算从样品采集到样品分析之间的允许时间非常重要，避免在制备样品溶液、提取、净化、相转移或样品瓶的贮存（在冰箱或在自动进样器里）过程中化学化合物在分析前发生降解。

　　用于稳定性实验的条件应反映实际样品在处理、贮存和分析时遇到的各种情况。通过比较放置周期内的溶液与新鲜制备溶液的仪器响应值来检测稳定性，通过样品溶液的重复测试、并计算测得值的RSD来确定溶液稳定性。

　　分析方法日常质量控制计划的制定

　　分析方法验证的目的不仅是在开始使用方法时保证分析数据的有效性，还要在方法的整个使用周期内都确保其有效性。为了证实方法和系统的性能在样品分析时与最初规定的相同，应在常规的样品分析中纳入适当的检查手段。

　　常用的持续试验是系统适用性试验和质控样品分析。色谱方法的系统适用性试验在药典中有规定，通常包括两个色谱峰之间的分离度、峰面积重复性、拖尾因子，以及理论板数。系统适用性试验作为任何分析过程的组成部分。

　　ISO17025 等质量管理标准和认可准则要求对质控样品进行分析，根据测定结果判断分析方法和系统是否受控。