琼脂糖核酸电泳实验

琼脂糖核酸电泳实验

1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架 好梳子；

2.根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确 称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般

20~30 ml）；

3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；

4.室温下 30~45 分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内 ；

5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面 1mm 为宜，如样品孔内有气 泡，应设法除去；

6.在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液（load ing buffer），混匀后，用枪 将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；

7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记 DNA 样品由负极往正极泳动 （ 靠 近加样孔的一端为负）。一般 60～100V 电压，电泳 20～40min 即可；

8.根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；

9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子 量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。