作为一些酶的辅基而起辅因子作用。它以共价键的形式通过酰胺键和脱辅基酶蛋白的一个专一赖氨酰残基的ε- 氨基相连。ε-N-生物素酰-L-赖氨酸称为生物胞素（biocytin） （图4[生物素作为辅基的形式]）。
需要生物素的酶类能催化二氧化碳的参入 （羧化作用）或转移，因而生物素和二氧化碳的固定密切相关医学教育|网。在羧化作用时还需要腺苷三磷酸（ATP）和镁离子的存在，此外生物素在蛋白质生物合成中以及转氨基作用中也起着重要作用。
