生物药物研发中的中和抗体简述

生物技术药物在带来治疗效果的同时可产生对新抗原的经典免疫反应和免疫耐受崩溃2种明显不同的免疫反应。因此在进行药物研发时需要进行生物药物的免疫原性检测，评价药物的免疫原性。抗药抗体中的中和抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合,或者通过空间位阻的作用,使药物失去与其靶点结合的能力,从而封闭、中和药物的治疗活性。免疫原性检测、评价(Immunogenicity Assay)和中和抗体的评价结果对于辅助同期进行的药效,药代(毒代)的数据分析,一些临床反应的解释以及药物的免疫原性特点分析都具有重要的意义。

1、生物技术药物免疫反应的类型

药物的免疫原性是指药物刺激机体形成特异性抗体或致敏淋巴细胞的物质。对新抗原的经典免疫反应，也称为过敏反应，常见于动物、微生物和植物来源的治疗性蛋白，如马的抗血清、链激酶、葡激酶和天冬酰胺酶等，特点是反应迅速，常常一次注射即可发生，发生率高，抗体常具有中和活性，滞留时间长。这种免疫反应原因比较清楚，在实验动物中容易复制，临床上常导致疗效丧失。来源于人的蛋白，如从垂体中分离的生长激素、血液中分离的第Ⅷ因子等，治疗这些蛋白缺乏的儿童也可以发生类似的反应，原因在于儿童发育过程中对这些蛋白不产生免疫耐受。美迪西提供免疫原性检测服务，主要使用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、非人灵长类动物做免疫原性毒性试验

免疫耐受奔溃容易对重组人干扰素、重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子等重组蛋白发生免疫反应，发生反应比较缓慢，在临床上可能需要几年时间才比较明显。一般发生率低，但对干扰素β的发生率很高，停药后抗体可能会消失，亦有继续给药很长时间后抗体消失的情况。免疫耐受崩溃的特点在于生物技术药物是体内蛋白的同源物。

2、什么是中和抗体

对生物技术药物结构和功能上相关的内源性蛋白质的中和活性检测在免疫原性检测中是免疫原性评价的常规内容。中和抗体是指由B淋巴细胞产生的，能识别抗原特异性部位而使抗原失去活性，抑制其功能的抗体，也被称为保护性抗体。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体称为中和抗体。

病毒可以刺激机体产生中和抗体，而中和抗体又与病毒结合后使病毒失去吸附细胞的能力，从而丧失感染力；病毒与其特异性的中和抗体相遇之后发生的作用，类似于化学中的相应酸碱相遇之后发生的中和反应，所以称这种作用为中和作用。如与保护性抗体（即中和性抗体）结合的抗原就叫保护性抗原，在疫苗(vaccine)的研制过程中主要是选取保护性抗原。但非中和抗体在临床上可能也具有意义，因为这些抗体可能会增强或减少药物清除，从而改变药物的半衰期、组织分布或某些靶器官暴露于药物的时间，最终可能影响其体内的活性和毒性。

3、抗体中中和抗体的检测方法

抗体中和活性的检测方法一般采用该制剂的生物学活性检测方法，如重组细胞因子采用国际上通用的依赖细胞株方法，把多个稀释倍数的动物血清与重组细胞因子混匀温孵适当时间后，加到已种植依赖细胞株的培养板孔里，通过测量吸收度或3H掺入水平确定抗体（血清内）是否降低重组细胞因子促进细胞增殖的活性。

由于采用基于细胞的抗体中和活性检测，灵敏度相对较低，因此也有采用分支DNA杂交技术（bDNA）检测靶基因表达变化，可以非常灵敏地检测到抗体的中和活性。如蛋白治疗剂在血清中水平高，会影响抗体中和活性检测，则可以通过酸解离和蛋白吸附剂偶联珠吸附的方法处理血清，再用细胞株的方法检测抗体的中和活性。，随着疾病进展，中和抗体可以被增强抗体所取代。最近，一些病毒和方法已被推荐用来检测中和抗体反应，尤其是由疫苗诱导的中和抗体。

在免疫学检测相关实验研究中，中和抗体还可以用作信号通路相关蛋白的特异性抑制剂，譬如白细胞介素相关中和抗体和CD表面marker相关中和抗体。在疫苗研制中，如通过比较我国不同企业研发的肠道病毒71型(EV71)疫苗原液和成品疫苗的小鼠中和抗体应答,可以为疫苗临床试验提供依据。