用于HPLC分析的超纯水——超纯水之角色

      糖分析是HPLC的典型应用之一,它广泛的应用在许多测试中用以确定膜的性能，一方面可以通过糖分析来确定膜去除糖分子的能力，另一方面也可检测膜固定化酶的活性。在分析中，目前通常采用薄层色谱法（TLC）、气体色谱法（GC）以及液相色谱法（HPLC）进行糖分析。尤其是当混合物中包含几种必须要分离的糖分类型时，更加需要使用这些方法。 

    本文所描述的HPLC，洗脱液必须具有极高的物理和化学纯度，并且不得含有悬浮机械性颗粒或任何在保留时间内由流穿色谱柱的溶解物质，因为这些溶解物质会产生干扰信号。溶剂的质量往往对HPLC分析的可靠性起到决定作用。去离子水或蒸馏水仍然含有微量的可产生鬼峰的有机物质[5]溶剂中的污染物会在固定相上不断累积，进而导致色谱柱的堵塞，样品运行期间压力的上升和漂移可以证明这一点。

使用arium® pro VF纯化水作为洗脱液

     HPLC所需的特殊品质的水可以从多家生产商处购买，也可以使用一个水纯化系统在现场直接生产，比如arium® pro VF系统。下面描述的是分离糖混合物的实验，其中的流动相（洗脱）使用的是由arium® pro VF生产的超纯水。

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材料和方法

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结果

1. 各种糖经 HPLC色谱柱后的分离结果。黑色曲线：糖混合物 在确定好每一种糖之后，便开始制备并分离糖混合物（图5）。

图5: 单一注射的糖样品的分离结果以及糖混合物用超纯水经交联8 % Na+的Rezex RNM

2. 通过注射磷酸钾缓冲液和自来水来模拟污染物的效应或盐的影响（图6）。

注射的自来水电导率为265µS/cm，磷酸钾缓冲液的电导率为1700µS/cm，两者都显示了清晰的信号，因而可以明显地辨别为污染物。在本次分析中使用的arium®超纯水的电导率为0.055µS/cm，基本不含干扰性杂质，表现为波形平坦，没有波峰产生（见图6中的绿色基线）。

图6：2µl的10mM磷酸钾缓冲液，2µl的自来水以及2µl的arium® pro VF超纯水的色谱图。

分析运行过程中的柱压恒定地维持在23bar(~ 334psi)。这表明了在色谱柱内没有沉积物累积。开始和结尾的空白运行未显示出任何改变；亦即，在流动相中没有污染物。

对不同浓度的标准系列进行分析，以确定重现性和检测限值。以棉子糖作为这些分析的例子。保留时间和峰面积均被记录并在表4中列出。

不断重复获得一致的保留时间说明了具有优异的重现性。棉子糖标准系列显示了一条浓度高达0.015mg/ml的线性曲线（图7）。

图7：棉子糖和arium® pro VF超纯水通过Rezex RNM Carbohydrate Na+ 8%色谱柱的标准系列（数值来自表4）。

根据量化样本的峰面积生成一条标准的直线，对棉子糖研究是完全可行的。

结论

     本文的研究结果显示由arium® pro VF生产的超纯水可以即时用作上文所列水溶性糖的HPLC分析的流动相，也可用于食品分析，环境分析，制药、化学和生物化学方面的研究，以及制药和生物行业的工艺中质量控制测试。arium® pro VF超纯水在HPLC色谱法中作为流动相所开展的研究以及所获得的经验，都使其可在不久的将来延伸用于其它分离技术，比如反相色谱，尺寸排阻色谱或超液相色谱技术等。