用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验

酪氨酸激酶分析缓冲液 酪蛋白激酶肽底物溶液

1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物：

5X 酪氨酸激酶分析缓冲液                           10 μl

10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液                5 μl

[γ-³²P] ATP（终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP)     5 μl

水（取决于下一步所加的激酶样品的量）      0~30 μl

5X 酪氨酸激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓沖液

100 mmol/L Tris-HCI，30℃ 时（pH 7.5)

25 mmol/L MgCl₂

2.5 mmol/L DTT

750 mmol/L KCl

2. 加入 1~30 μl 激酶样品开始反应，继续于 30℃ 孵育一定时间。

3. 停止反应，依照利用 β-酪蛋白作底物的分析反应产物。