用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—依赖环核苷酸

激酶分析缓冲液组蛋白 2B 储存液环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液环核苷酸储存液

1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：

5X 激酶分析缓冲液 4 μl，10 mg/ml 组蛋白 2B 储存液 1 μl，[γ-³²P] ATP（终浓度为 5 μCi/5 μmol/L ATP） 1 μl，水（取决于下一步所加的激酶样品的量） 0~14 μl

10X 环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液

20X 环核苷酸储存液

2. 往上述反应混合物中加 1~14 μl 激酶样品，开始反应。

3. 于 30℃ 反应一定时间（先做预实验，从 10 分钟时起，最好选线性反应期的某个时间点）。

4. 制备样品进行 TCA 沉淀分析、SDS-PAGE 或者用 P81 磷酸纤维素滤纸分离标记的组蛋白。