多聚类异戊二烯取代物的确证
羧基甲基化的证实
| 实验材料 | 蛋白 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 牛血清白蛋白 氢氧化氨 |
| 仪器、耗材 | 试管 |
| 实验步骤 | 1. SDS-PAGE 和电洗脱分离目的蛋白。 2. 洗脱的蛋白中加牛血清白蛋白载体使最终浓度为 0.1 mg/ml，并用 5 倍体积的含 1.5% 氢氧化氨的冰冷丙酮处理 30 分钟以沉淀蛋白。 3. 离心收集沉淀蛋白，倒掉上清，在真空下干躁沉淀物。 4. 在 0.4 ml 的乙醇：甲酸（4:1 ) 溶液中重悬蛋白，并转到一个带玻璃螺丝帽的试管中。  5. 加 0.1 ml 的拉尼镍混合液（Aldrich），然后加 1 ml 水饱和戊烷。 6. 用 Teflon 带绕细线封紧试管，并用 Teflon 线拧上一个帽。 7. 在 100℃ 热块上加热试管过夜。 8. 取出顶层保存在一个新试管中，然后再用 1 毫升戊烷再次抽提底层。 9. 收集戊烷层于圆锥型样品瓶中，在盐水冰浴中蒸发到干燥。 10. 用 100~200 μl 的己烷清洗试管的侧壁，将己烷溶液倒入一个干净的锥形样品瓶中，并且蒸发至较少的体积（10~20 μl）。 11. 通过放射气相液体色谱法分析样品，使用 15 m、DB-5、中等极性的百万孔的柱子去分离并按照下列条件走柱： 后始温度，100℃；启始时间，4 分钟；速率，每分钟 10°。最终温度，300℃；最终时间，1 分钟。 |
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