照高效液相色谱法(通则0512)测定。
避光操作。供试品溶液取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于甲状腺粉65mg,约含左甲状腺素38g),置预先充有氮气的带螺帽试管中,尽量减少在空气中暴露的时间,精密加入蛋白水解酶溶液[称取氯化钠6.435g、三羟甲基氨基甲烷4.846g和他巴唑5.708g,置1000ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,必要时用6mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.4±0.05,作为还原性缓冲溶液。
临用前,取链霉蛋白酶(P5147)适量,加还原性缓冲溶液溶解并稀释制成每1m中含链霉蛋白酶lmg的溶液]5ml。缓缓通入氮气流5分钟,盖上螺帽,摇匀,置带盖的水浴中,于37℃±1℃水解28小时,期间不时检查混合物分散情况,必要时摇匀。精密加入1%磷酸乙腈溶液2ml,振荡,以每分钟2000转离心5分钟。取上清液滤过,取续滤液。对照品溶液、色谱条件、系统适用性要求与测定法见甲状腺粉含量测定项下。