甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验

琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。

RNA

MOPS 乙酸钠 EDTA 蔗糖 EDTA 溴酚蓝 二甲苯青 甲醛

电泳槽 电泳仪

1.  制备凝胶: 琼脂糖浓度1 . 2% , 加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛, 使两者的终浓度分别为1×甲醛凝胶电泳缓冲液和2.2 mol/ L;

2.  取一定量的RNA 样品, 加入5 × 甲醛凝胶电泳缓冲液2 . 0 μl , 37%甲醛3 . 5 μl , 去离子甲酰胺10 . 0 μl , 稍微离心混匀后置65 ℃水浴15 min , 然后迅速置于冰浴中5 min; 加入2 . 0 μl 加样缓冲液, 稍微离心;

3.  上样前, 凝胶在1 × 甲醛凝胶电泳缓冲液预电泳5 min(电压5 V/ cm) ;

4 . 将样品加到凝胶样品孔, 以4 V/ cm 电压进行电泳; 每隔30 min 将阴阳电极液混匀, 然后继续电泳;

5.  电泳结束后, 将胶放入0 . 5 μg/ ml 的EB 溶液中, 染色30 min; 紫外观察。