电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验

冻干的纯化蛋白样品

甲酸 氢溴酸 过氧化氢 NaOH 固体

旋转蒸发器 小试管

1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中，在室温下放置让，将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。

2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。

3.在预冷的小试管中，将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中（500ug/ml)。

4.盖上帽子，0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白质不溶，把反应延长到 20 h。

5.加入 30ul 氢溴酸，去除多余的过甲酸。

要特别小心，可能会释放出来少量的溴。

6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的 NaOH 固体，以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要 10 min。

由于许多氨基酸被修饰，推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于 S—S/S—H(半胱磺酸）和甲硫氨酸基团（甲硫氨酸砜）的定量分析，而不是序列分析。