电荷异构体

　　对于单抗电荷变异体的测定有多种分析方法，20版中国药典通则3129收录了单抗电荷变异体测定法-全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（icIEF法）外，新版中国药典将毛细管等电聚焦电泳（cIEF法）也写入3129通则。

　　离子交换(IEX)色谱和成像毛细管等电聚焦(iCIEF)或（CIEF），传统上都使用紫外（UV）作为检测器，无法对分离后的电荷变异体进行更深入的鉴定。为了分析电荷异构体的成因，必须进行准确的定性分析，高分辨率质谱（HRMS）是定性蛋白质分析的有力手段之一。

　　SCX-MA方法

　　赛默飞发表了一种以pH梯度为基础的SCX-MS方法，用于单抗的电荷异构体分析，仅需要使用低浓度的挥发性缓冲溶液即可实现单抗及其电荷变异体的洗脱，实现了SCX分离与 MS的联用。此外SCX色谱柱分析100针以上仍然具有较好的重复性和分离度，与在线二维方法相比，该方法更简单，无需搭建复杂的硬件系统和方法设置即可实现电荷异构体的表征。

阿达木电荷变异体分离图

阿达木抗体片段分析

阿达木酸碱变异体解析

　　icIEF-Orbitrp方法

　　icIEF-Obritrap HRMS在线联用分析或可与传统的LC-MS相结合的离线制备，为在蛋白质治疗开发过程中区分和识别电荷异构体体提供了的便捷和可靠的分析策略。

　　1）icIEF质谱在线联用，直接且快速地识别 PTM，包括可能影响生物治疗药物安全性和有效性的糖基化和电荷变异体。

　　2）高效且简便得组份分离后与传统LCMS结合深入表征电荷异构体，以研究您的生物治疗药物的效力、安全性和功效。

　　icIEF-MS在线联用实例：mAb 1

　　电荷变体分析工作流程

　　使用 ProPac 3R 色谱柱进行蛋白类药物电荷变体分析

　　Thermo Scientific™ ProPac™ 3R系列阴离子交换色谱柱和阳离子交换柱，采用了单分散颗粒技术，对于比较难分离的双特异性抗体、ADC、融合蛋白等样品，在比较低的流速下比经典的ProPac系列和MAbPac 系列离子交换柱有更好的酸碱峰分离效果。既节约了分析时间，试剂成本，又提高了分离效率。在四元系统上，搭配Thermo Scientific CX-1 pH梯度缓冲液，可以实现快速盐梯度方法和pH梯度方法开发，可简化对主要产品和杂质进行高分离度分离的方法优化过程