疑似人禽流感／不明原因肺炎病例标本核酸检测

一、标本的采集

尽量采集下呼吸道标本，如下呼吸道吸取物和肺穿刺标本等。采集标本的溶液使用新开封的DMEM或者Hanks（PH7.0，过酸或过碱都会导致病毒的灭活，不利于病毒分离）液，标本采集之后要密封好。送往国家流感中心进行复核的病例标本采集之后直接送检，如要分装，在洁净的BSL-2 生物安全柜内操作。

二、核酸的提取

疑似禽流感/不明原因肺炎核酸检测各个实验区域应尽量分开，如反应液配制区域、核酸提取区域和检测区域最好分别位于独立的房间内。如果不能做到各个实验区域分开，实验操作开始前应做好清理净化工作：实验区域的台面先用清水擦拭一遍，再用蒸馏水擦拭一遍，最后用75%的医用酒精擦拭一遍。核酸提取的生物安全柜台面擦拭过后，紫外消毒20~30分钟，然后开启超净台的通风装置，净化至少10分钟。

核酸提取和配制反应液使用的移液器应分开使用，并且做到专用，如不能分开使用，则实验操作前用含有DNase和RNase的溶液擦拭，或者清水多次擦拭，去除核酸污染。核酸提取时，离心机、振荡器等实验仪器应位于同一区域内，避免来回走动产生气溶胶。核酸提取过程中同时提取一个阴性对照作为参考。使用过的废弃Tip头应及时放入自封袋内，实验结束后进行高压灭菌。

三、核酸检测反应体系的加样

核酸检测反应体系配制完毕后，先向反应液中加阴性对照，待所有阴性对照加样完毕后再加待检测标本的核酸，最后加阳性对照。使用过的废弃Tip头应及时放入自封袋内， 实验结束后进行高压灭菌。

四、PCR产物电泳

由于电泳过程是最容易造成气溶胶污染的环节之一,电泳区域一定要同其它区域在物理上分开.，及时清理实验废弃物，净化实验工作台面。

五、生物安全

无论是标本采集过程中还是实验检测过程中，所有工作人员要做好个人防护，佩戴N95口罩、帽子和无粉乳胶手套，穿防护服，避免实验室感染的发生。