病原微生物染色实验——乙型肝炎表面抗原

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是由多肽组成的脂蛋白，由于抗原内含有丰富的二硫键成分，经过氧化剂而转变为磺酸，然后再与染色液产生较强的亲和力进行着色。通过地衣红（Orcein）染色法，能够较好地显示乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。

石蜡组织切片

二甲苯无水乙醇中性树胶蒸馏水地衣红高锰酸钾乙酸浓盐酸草酸

滴管

地衣红染色液：地衣红 1 g，70％ 乙醇 95 ml，浓盐酸 5 ml。充分溶解后，调 pH 值为 1.2～1.6 即可。

酸性氧化液：高锰酸钾 0.5 g，盐酸 0.15 ml，蒸馏水 10 ml。

草酸溶液：草酸 2 g，蒸馏水 100 ml。

1. 石蜡组织切片，常规脱蜡至水。

2. 酸性氧化液处理 5 min。

3. 自来水洗后用草酸溶液漂白 5 min。

4. 蒸馏水洗 3 次。

5. 浸入 70％ 乙醇中 2 min。

6. 浸入地衣红染色液中 5～10 h（对新配制成的染色液，以及室温 15℃ 以下时还可适当延长时间）。

7. 直接用 95％ 乙醇分化至阳性物质清晰为止。

8. 无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1. 酸性氧化液不能存放时间较长，防止失去氧化作用。

2. 地衣红染色用于肝穿刺时，必要时可用对照片（阳性）进行染色。

结果：乙型肝炎表面抗原阳性物质呈棕色。