病毒的保存实验

实验方法原理 含水物质首先经过冷冻，然后在真空中使水分升华，干燥，在这种低温、干燥和缺氧环境下，微生物的生长和代谢暂时停止，因而保存期较长，便于运输。该法需要冻干机等设备，并需保护剂。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。保护剂的作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构，防止细胞膜受冷冻或干燥而造成损伤。真空冻干病毒比较稳定，可于室温短期保存， 4~8℃长期保存。此法综合利用了各种有利于毒种保存的因素，具有成活率高，变异性小等优点，是常用的较理想的毒种保存方法之一。

实验材料 待保存病毒

试剂、试剂盒 保护剂95% 乙醇

仪器、耗材 安瓿管真空泵

实验步骤

1. 准备安瓿管。市售的安瓿有直管式的，也有底部为球形的球式安瓿，也可选用中性硬质玻璃自制安瓿管。安瓿管清洁后，将标有病毒的标签放人安瓿管内，高压灭菌后备用。

2. 制备保护剂。冻于菌种的保护剂种类很多，常用脱脂牛奶，可配成 20%乳液，分装，高压灭菌，并作无菌试验。

3. 制备病毒悬液。吸取 3 ml 无菌牛奶加入毒种，轻轻摇动，再用手搓动试管，制成均匀的病毒悬液。

4. 分装及预冻。用无菌的长颈滴管将病毒悬液分装于安瓬管底部，每管装 0. 2 ml 。将安瓬管上端烧熔成细颈，将安瓬整个浸入装有干冰和 95% 乙醇的预冻槽内，槽内温度约为- 50℃~- 40℃, 可使悬液冻结成固体。

5. 真空干燥。完成预冻后，开动真空泵抽气，气压降至 133. 3 kPa 以下，维持冻结剂可于 4 h后移去，继续于室温中抽气，达到完全干燥。

6. 封管。待毒种完全干燥后即从干燥缸内取出安瓿瓶，置于抽气管上抽成真空，约需 3~10 min。用高频真空检测仪检查后，置 4℃冰箱保存。

注意事项

1. 一般病毒应保藏于低温、清洁和干燥的地方。

2. 毒种操作必须在无菌条件下进行，防止污染。

3. 对于已发生变异的病毒，可通过接种易感动物将具有毒力的病毒重新选择出来，该法还可同时使一些表型变异的病毒恢复原有特性。

4. 实验室用培养基保存毒种时，应保存两套，一套供保存传代，另一套供日常应用。

5. 病毒株的保存需有专人负责，同时有专门的记录薄，记录的内容有：①毒株的名称及数量；②毒株的来源（研究室名、时间、毒株从何种材料上分离、传代于何种动物、传代数、分离情况等）；③本实验室传代的情况（传代者姓名，传代的代数，传代后的保存方法及保存数量）④保存毒种的容器（安瓶、玻璃试管、塑料冻存管等）；⑤毒株的保存性质（组织块、悬液、液体或冻干）；⑥毒株的毒力；⑦保存年、月、日。