1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 （g/ml，加至40 孔板，每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时，再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。
2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40 孔板，每孔0.2 ml。置湿盒，37 ℃1 小时，用洗涤液洗三次。
3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中，每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜，用洗涤液洗三次。
4. 用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEV IgG，加至40 孔板，每孔0.2 ml，37 ℃l 小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2 ml。避光置室温30 分钟。加2M H2SO4 0.05 m1，终止反应。
用分光光度计测出各孔OD 值，波长选择495 nm。
4. 结果
P/N （3.0 为血清JBEV IgM 抗体阳性。
标本平均OD 值- 空白对照OD
阴性对照OD 值一空白对照OD
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